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详细内容
RNase R是circRNA的富集和鉴定实验必备工具酶,可消化线性RNA以使环形RNA(circRNAs)或套索结构RNA(lariat RNA)得到富集。
RNase R消化RNA示意图
应用场景
circRNA的富集:高通量测序是大批量发现circRNA快捷的方法,需要对circRNA进行富集,此时RNase R消化就是必须的。
circRNA的鉴定:根据RNase R(+)和RNase R(-)组中是否检测到条带来证明检测的分子是circRNA。
产品特征
特异性:特异性消化线性RNA
高效、快速:5-15min即可消化大部分线性RNA
buffer兼容性:消化产物可直接用于下游逆转录
使用方便:2种试剂,1步反应
产品信息
名称 | 货号 | 规格 | 目录价(元) | 保存温度 |
Ribonuclease R(RNase R) | R0301 | 500 U | 2280 | -20℃ |
R0302 | 5000 U | 询价 | -20℃ |
标准反应体系下,于 37℃,10 min 将 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定义为一个活力单位(U)。
产品组分
Storage Buffer | 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton® X-100, 50% Glycerol |
10X Reaction Buffer | 200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2 |
反应体系
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。
注:1)RNase R 在 0.1-0.5 mM Mg2+存在时活性高,反应中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此时可额外添加 MgCl2 使 Mg2+ 浓度高达到 0.5 mM。2)孵育后可于 70℃,10 min 使酶失活,再进行下游实验(如逆转录);也可不灭活,直接纯化后进行下游实验。
质量控制
SDS-PAGE 检测纯度>99%;Total RNA 经 RNase R 消化后进行 RT-qPCR 检测,线性 RNA 丰度明显降低, 环形RNA 丰度基本不变。
性能比较:RNA电泳检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后直接进行电泳检测,结果显示RNase R+组28/18/5S条带变淡(不可见),表明RNase R对total RNA的消化作用。吉赛和公司e或公司a的RNase R对total RNA消化效果相当。
性能比较:qRT-PCR检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中,于37℃孵育30 min,之后进行RT-qPCR实验,结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的丰度基本不变,表明环形RNA耐受RNase R的消化。吉赛和公司e或公司a的RNase R效果相当。
注:数据计算以“RNase R+吉赛”组为对照,设定其相对丰度值为1。