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我们可以根据您的应用需要,比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求,而量身定制检测试剂盒,有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。
二、如何降低试剂盒背景的步骤
大家都知道Elisa背景太高,会导致试剂盒检测失败,那么背景过高,而您怀疑洗涤不够时,根据我司多年经验。可以尝试增加洗涤次数。这种封锁液便宜、不乱,在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。假如浓渡过高,或者未准确稀释,则会导致高背景。常用的蛋白封锁液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。封锁液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜伏的结合位点。ELISA实验的原理好像很简朴,不过乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着洗涤和封锁。假如您的背景过高,怀疑封锁不充分,那么您可以尝试使用更高浓度的封锁液,或适当延长封锁时间。血清组分的内在多样性可使它有效拦截很多不同类型的分子相互作用。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封锁液,后者可协助洗涤过程中的封锁。解决这个题目的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。好的封锁液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比。
假如您的ELISA不幸地碰到了高背景,那么也无需太担心,依次查看ELISA系统中的组分,并排除可能存在的题目。记住,非特异的抗体结合会增加背景。不外,它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%),它会降低特异结合,产生假阴性。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。目前主要有两种类型的封锁液:蛋白和非离子型去污剂。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。假如您一直被背景题目所困扰,那么也许您该花些时间来优化封锁液。
三、“人抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒”技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法(检测未知抗体)
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
四、购买“人抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒”客户须知
1、液体类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等);
2、样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存;
3、请提前告诉我们:您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。
五、Elisa试剂盒报告内容及标准
1、ELISA标准曲线;
2、详细的实验步骤;
3、完整的实验报告(试剂耗材,实验方法,实验结果及结果说明);
4、实验进行阶段,我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。
六、“人抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒”具备价廉质保特色优点
1.灵活运用:我司试剂在目前市场上包含种属、种类上千种。
2.降低成本:我公司实验室采进口原料包备,价格实惠,能为您节省开支。
3.R&D 认可:通过美国R&D公司认可,荣获代理权,质量放心且保证。
4.另提供无成分试剂-试剂不含配方,不造成环境重金属污染。
5.包装精良:透明玻璃管附铁氟龙旋盖,直径16mm,外盒为生物可分解材质,具环保概念。