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ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。
“人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒”标本收集:
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃,-70℃电冰箱内,避免反复冻融,3-6月内检测。
二、正确操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件
1. 加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
2. 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4. 合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
三、“人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒”特点
1.一般有两种金标二抗,配Goat-anti-Rabbit和Goat-anti-Mouse抗体
2.精细纯化并经过预吸附的抗体
3.同rabbit 和mouse的单抗和多抗一起使用
4.很低的背景
5.电镜级别,非常适于电镜下的单标或者双标
计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
四、实验前的准备
1.要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
2. “人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒”实验时,要使底物避光保存。
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