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各种类型ELISA测定时一般需经过这些步骤:固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果。
1.重复某一样品时,加样时间尽可能与次接近。
2.加样后在混匀器上充分混匀。
二、ELISA常用的几种方法
1、双抗体夹心法测定抗原
将抗原免疫种动物获得的抗体吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗体复合物;
加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物;
加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);
加底物。底物的降解量=抗原量。
2、直接法测定抗原
将抗原吸附在载体表面;
加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物;
加底物。底物的降解量=抗原量。
3、间接法测定抗体
将抗原吸附于固相载体表面;
加抗体, 形成抗原-抗体复合物;
加酶标抗体;
加底物。 测定底物的降解量=抗体量。
三、注意事项
1.操作“兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒”时必须戴手套,穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度。
2.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
3.样品稀释液应用加液器加注,并经常校对其准确性。
四、ELISA操作技巧
1.合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
2.显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3.加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
4.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
五、ELISA方法特点
1.基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达,表达产物包含更多的抗原决定簇,可提高试剂盒的灵敏度,提高检出率。
2.分子量大:合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸。而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。
如果您购买了“兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒”之后没时间做实验,我公司可以安排专业的技术人员为您进行免费代检测。
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