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丙二醛含量检测说明书
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上传时间：2015/6/5 10:44:49
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上 传 者：劲马免疫学第三方检测中心
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血清、细胞培养上清以及组织、细胞样本
过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在 532nm 处
有吸收峰。
二、试剂盒组分
注：标准品浓度：1nmol/ul
三、 检测样本的预处理
1. 组织
新鲜组织样本 100mg，以 1ml 预冷的试剂Ａ匀浆成 10%的匀浆液，12000g 离心 5min，取上清待检测。
2. 细胞
消化细胞并离心收集，计数 106 个细胞每管，加入 1ml 预冷的的细胞裂解液（IP 裂解液客户自备或购买凯 基产品 KGP701），每隔 5min 剧烈震荡 30s，冰上裂解 20min，12000g 离心 5min，去上清待检测。
四、 操作方法
1. 标准曲线的绘制
以组织样本为例，参照组织样本检测方法，取 5 个离心管，按下表加入下列试剂：
混匀后，每管加1ml 双蒸水，快速混匀，置于沸水浴中煮沸50min，快速放至冰水中冷却，3000r/min、4℃
离心15min，取上清于532nm 读数。
2. 样本检测
（1）血清以及细胞培养上清：
取0.25ml 样品加入到1.5ml试剂C溶液中，混匀后，加入0.3ml试剂D，混匀后于沸水浴中煮沸40min，快速 放入冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm 读数。
（2）组织匀浆液
取0.2ml 匀浆上清液，加入0.2ml 试剂B，混匀后加入1.5ml 试剂C和1.5ml 试剂D，混匀，每管加入1ml 双 蒸水，快速混匀。沸水浴中煮沸50min，快速放入冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm 读数。
（3）培养细胞样本
取0.2ml细胞裂解液，加入1.5ml 试剂C 和1.5ml 试剂D，混匀，每管加入1ml 双蒸水，快速混匀。沸水浴 中煮沸50min，快速放入冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm 读数
3. 结果判断
（1）以标准品含量作为横坐标，OD值作为纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可 在标准曲线上查出其浓度。
（2）若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
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