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2D 电泳细胞裂解液使用说明
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上传时间：2015/7/10 10:23:41
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上 传 者：劲马免疫学第三方检测中心
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Store at -20℃ for 12 months
For Research Use Only
一、 试剂盒说明
样品制备是双向电泳中*为关键的一步，这一步处理的好坏将直接影响 2D 电泳结果。 2D 电泳细胞裂解液（总蛋白）可以帮助您方便地从动物组织和细胞中提取总蛋白（含可溶性膜蛋白）。
二、 试剂盒组份
| 组份 | 含量 | 储存温度 |
| 2D 电泳细胞裂解液（总蛋白） | 50 mL | 2-8℃ |
| DTT | 0.5 mL | -20℃，避光 |
备注：
1．为取得*佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。建议可适当分装后使用。
2．所有接触样品的用具及试剂均需预冷。裂解蛋白的所有步骤都需在冰浴或 4℃进行。
3．可参考凯基产品相关说明（见凯基网站）或通过预实验来确定适合您实验条件的*佳裂解液。
4．提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。
5．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6．DTT 在蛋白裂解工作液临用前 1：100 加入 2D 电泳细胞裂解液（总蛋白）中，现用现配。
三、操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
（1） 采集新鲜组织样本；
（2） 用研钵在液氮冷冻条件下将样品研成粉末，每 100mg 样品加入 0.4-0.5ml 裂解液工作液中，使用组织匀浆器 匀浆 30s（注意 1）。
（3） 组织悬液 15℃，20 000×g 离心 30 min（注意 2）。
（3） 吸取上清。沉淀用 1/4 体积的步裂解液用量重悬，涡旋剧烈震荡 30s 后，15℃，20 000×g 离心 30 min。
（4） 合并两次上清液，吸取少量上清用 Bradford 法定量蛋白，然后分装至 Eppendof 管里保存在-70℃备用。（注 意 3）
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
（1） 培养细胞的收集；
（2） 用磷酸缓冲液（PBS）洗细胞 3 次（室温，1000g，各 2min）；
（3） 将细胞分装到 1.5ml Eppendof 管中，吸干残留的 PBS；
（4） 加入裂解缓冲工作液（1.5x106 个细胞大约加入 100µL 裂解液），在室温振荡 1h，使其充分溶解（注意 1）；
（5） 4oC，40,000g，离心 1h（注意 2）；
（6）吸取上清并用 Bradford 法定量蛋白，然后分装至 Eppendof 管里保存在-78oC 备用（注意 3）。
四、注意事项
1. 核酸的去除可采用超声或核酸酶处理，超声处理应控制好条件，防止产生泡沫；加入的外源核酸酶则会出现在*终 的 2D 胶上。
2. 脂类和多糖都可以通过超速离心除去。
3. 透析可以降低盐浓度，也可以采取凝胶过滤或沉淀/重悬法脱盐，但会造成蛋白质的部分损失。
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