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ELISA试剂盒实验步骤
点击次数：114 发布时间：2023/11/8
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种基于抗原-抗体反应的免疫学检测方法，通过酶与抗体或抗原的结合，将抗原-抗体反应的特异性、敏感性和可重复性提高。ELISA试剂盒通常包含包被有特异性抗体的微型板、酶标记的特异性抗体、酶底物等。
二、实验步骤
1. 酶标板设置
将ELISA试剂盒中的酶标板放置在实验台上，将不用的孔用封口膜封住，防止污染。根据实验设计，将特异性抗体包被在酶标板上，设立阴性对照、阳性对照等。
2. 加样
根据实验设计，用移液器将样品和标准品加入相应的孔中，加入样品时应避免产生气泡。加样时应缓慢而谨慎，避免在孔壁上产生泡沫。每个样品或标准品应设复孔，每个孔加入样品或标准品的体积应相同。
3. 孵育
将酶标板在37℃下孵育一定时间，使抗原-抗体充分结合。孵育时间根据试剂盒说明书而定，一般约为1小时至数小时不等。孵育时应保证酶标板垂直放置，以免液体溢出。
4. 洗涤
将酶标板轻轻摇动，使未结合的抗原-抗体结合物从孔中冲洗掉。洗涤时应保证每个孔中的液体完全流出，避免残留。洗涤次数根据试剂盒说明书而定，一般为2-3次。
5. 加酶标物
根据试剂盒说明书，将酶标记的特异性抗体加入相应的孔中，加入时应缓慢而谨慎，避免在孔壁上产生泡沫。每个孔加入的酶标物体积应相同。
6. 孵育
将酶标板在37℃下孵育一定时间，使酶标记的特异性抗体与抗原充分结合。孵育时间根据试剂盒说明书而定，一般约为30分钟至1小时不等。孵育时应保证酶标板垂直放置，以免液体溢出。
7. 洗涤
将酶标板轻轻摇动，使未结合的酶标记特异性抗体从孔中冲洗掉。洗涤时应保证每个孔中的液体完全流出，避免残留。洗涤次数根据试剂盒说明书而定，一般为2-3次
。
8. 加底物
根据试剂盒说明书，将底物溶液加入相应的孔中，加入时应缓慢而谨慎，避免在孔壁上产生泡沫。每个孔加入的底物体积应相同
。
9. 终止反应
在适当时间后，根据试剂盒说明书加入终止液，使反应停止。终止液的加入量应按照说明书要求进行。
10. 检测
用酶标仪检测各孔的光密度值，记录数据并进行分析。通常采用450nm波长进行检测，但具体波长根据试剂盒说明书而定。
