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下面说下ELISA实验常遇到的问题以及解决方案。
异常
结果描述
【白板】
显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。
原因分析
1.试剂已过效期，或不同试剂盒组分混用
2.错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B
3.洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力
4.终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配置
5.蒸馏水有问题
对策
1.检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
2.严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象
3.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净
4.每次配制时都应看清标签标明物质
5.确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染，与好蒸馏水比较
人组织蛋白酶V(CTSV)酶联免疫试剂盒
显色弱、灵敏度 低
实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。
1.试剂盒超过期， 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号； 试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响
2.试剂、样品用未平衡至室温
3.加入试剂的体积和时间有误， 移 液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁
4.洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力
5.孵育时间及孵育温度未达到要求 ，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整
6.洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求；洗涤冲击力太大。浸泡时间太长
7.显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入
8.底物作用时间不够
9.蒸馏水水质有问题
人组织蛋白酶V(CTSV)酶联免疫试剂盒
对策：
对策：
1.实验检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。 不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。
2.从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。
3.确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。 校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全
4.确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染
5.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。 保温期内不宜多开门，以免影响保温
6.严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数
7.显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂?A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入
8.准确定时
9.测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响
实验结束后阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱
1.待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的
2.标本加入叠氮钠作为防腐剂
对策
1.如有怀疑，可复检
2.酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂
人组织蛋白酶V(CTSV)酶联免疫试剂盒
阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出
1.未达要求的孵育温度及孵育时间 可检出强阳性标本，但 质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出
2.质控品或标本高温放置过久，或被反复冻融致待测物滴度下降，而未能检出
3.仪器设定不正确，滤光片不匹配
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