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苏丹红ELISA试剂盒现货
点击次数:251 发布时间:2013/5/23 13:51:53
实验原理
本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测苏丹红。微孔板上包被有苏丹红偶联物。加入苏丹红抗体和苏丹红标准品或样品,游离苏丹红与微量反应板上的苏丹红结合物竞争结合抗苏丹红抗体,没有结合的抗体被洗去,再向微孔中加辣要过氧化物酶标记二抗,与结合在反应板上的抗体作用一定时间,洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。再向反应孔中加入相应反应底物TMB,作用一定时间后,结合的酶结合物将TMB转化为蓝色,转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的苏丹红呈负相关。用酶标仪在450mm波长下测定吸光度(OD)值,计算样品浓度。
苏丹红ELISA试剂盒现货操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.酶联板使用前用洗液板2-3次,每次浸泡1-2分钟,250ul/每孔,甩干。
2.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔从高到低分别加标准品或待测样品50ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,然后在所有孔中加入50ul苏丹红抗体工作液。尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应30分钟(为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液)。
3.温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,250nl/每孔,甩干。
4.所有孔中加入100ul辣根过氧化物酶标记二抗工作液。尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应30分钟。
5.温育后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,250ul/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90ul, 37℃避光显色(30分钟内,一般10-15分钟内,此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度蓝色,前3-4孔颜色不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。
试剂盒组成
1 | 标准品 | 6×250ul/瓶 | 5 | 辣根过氧化物酶标记二抗 | 1×120ul/瓶 |
2 | 样品稀释液 | 1×20ml/瓶 | 6 | 底物溶液 | 1×10ml/瓶 |
3 | 辣根过氧化物酶标记二抗稀释液 | 1×20ml/瓶 | 7 | 浓洗涤液 | 1×20ml/瓶 |
4 | 苏丹红单克隆抗体 | 1×60ul/瓶 | 8 | 终止液 | 1×10ml/瓶 |
苏丹红ELISA试剂盒现货计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2.洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请*后乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
9.本产品适用于大量样本的快速筛查。
本试剂盒仅供研究使用
检测范围:0.312ng/ml-10ng/ml
检测限:0.2ng/ml
特异性:本试剂盒可用于快速检测苏丹红,与对们红有一定交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定鸡蛋、辣椒、辣椒酱等样品中的苏丹红残留。
苏丹红ELISA试剂盒现货说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
原创作者:上海博研生物科技有限公司