企业档案
- 会员类型：免费会员
- 工商认证： 【未认证】
- 最后认证时间：
- 法人：
- 注册号：****
- 企业类型：代理商
- 注册资金：人民币**万
Elisa 试剂盒
- 其它ELISA试剂盒
- 人的ELISA试剂盒
- 猴子的ELISA试剂盒
- 大鼠ELISA试剂盒
- 小鼠ELISA试剂盒
- 其它鼠种的ELISA试剂盒
- 羊Elisa 试剂盒
- 羊的ELISA试剂盒
- 植物ELISA试剂盒
- 鹅ELISA试剂盒
- 鸭ELISA试剂盒
- 鸡ELISA试剂盒
- 鱼ELISA试剂盒
- 猪Elisa 试剂盒
- 牛Elisa 试剂盒
- 马Elisa 试剂盒
人的ELISA试剂盒
猴子ELISA试剂盒
大鼠ELISA试剂盒
小鼠ELISA试剂盒
其它鼠ELISA试剂盒
羊Elisa 试剂盒
猪Elisa 试剂盒
牛Elisa 试剂盒
马Elisa 试剂盒
鸡ELISA试剂盒
鸭ELISA试剂盒
鹅ELISA试剂盒
鱼ELISA试剂盒
其它生物的ELISA试剂盒
蛋白
抗体和抗原
小分子
Elisa 试剂盒
- 植物的Elisa试剂盒
- 人的Elisa 试剂盒
- 猴子的Elisa 试剂盒
- 大鼠Elisa 试剂盒
- 小鼠ELISA试剂盒
- 其它鼠种的ELISA试剂盒
- 羊Elisa 试剂盒
- 猪Elisa 试剂盒
- 牛Elisa 试剂盒
- 马Elisa 试剂盒
- 鸡Elisa 试剂盒
- 鸭ELISA试剂盒
- 鹅ELISA试剂盒
- 鱼ELISA试剂盒
- 蜥蜴的Elisa 试剂盒
- 鲸的Elisa 试剂盒
- 海狮Elisa 试剂盒
- 貂Elisa 试剂盒
- 鸽子的Elisa 试剂盒
- 大象的Elisa 试剂盒
- 鹿的Elisa 试剂盒
- 类人猿的Elisa 试剂盒
- 骆驼的Elisa 试剂盒
- 兔子的Elisa 试剂盒
- 驴的Elisa 试剂盒
- 猫的Elisa 试剂盒
- 犬的Elisa 试剂盒
- 其它ELISA试剂盒
标准品
诊断试剂原料
分子生物学产品
联系我们
联系人：邵先生
热门标签
技术文章
蛋白质组技术的研究进展
点击次数：661 发布时间：2013/5/27 11:36:03
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定。1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成。然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点。在基因组时代，许多DNA序列信息仅提供相关基因组的结构和功能。然而，对基因产物（mRNA和蛋白质）的理解是理解细胞生物学的一个不可缺少的部分。DNA序列信息不能预测：1）基因表达产物是否或何时被翻译；2）基因产物的相应含量；3）翻译后修饰的程度；4）基因剔除或过表达的影响；5）遗留的小基因或<300 bp的ORFs的出现；6）多基因现象的表型。此外，mRNA水平的测量并不能完全揭示细胞调节；且蛋白质的样品较mRNA 稳定；蛋白质和mRNA之间的相关系数仅为0.4～0.5，还存在转录后加工、翻译调节以及翻译后加工等。故而，“基因组时代”的迅猛发展同时激起了人们对“后基因组时代”中蛋白质组研究的需求。
1 蛋白质组的含义
蛋白质组（Proteome）的概念*先由Marc Wilkins提出，指由一个基因组（genOME），或一个细胞、组织表达的所有蛋白质（PROTein）。蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别，它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。在转录时，一个基因可以多种mRNA形式剪接，并且，同一蛋白可能以许多形式进行翻译后的修饰。故一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物，蛋白质组中蛋白质的数目有时可以超过基因组的数目。
蛋白质组学（Proteomics）处于早期“发育”状态，这个领域的专家否认它是单纯的方法学，就像基因组学一样，不是一个封闭的、概念化的稳定的知识体系，而是一个领域。蛋白质组学集中于动态描述基因调节，对基因表达的蛋白质水平进行定量的测定，鉴定疾病、药物对生命过程的影响，以及解释基因表达调控的机制。作为一门科学，蛋白质组研究并非从零开始，它是已有20年历史的蛋白质（多肽）谱和基因产物图谱技术的一种延伸。多肽图谱依靠双向电泳（Two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）和进一步的图象分析；而基因产物图谱依靠多种分离后的分析，如质谱技术、氨基酸组分分析等。
2 蛋白质组研究的核心用于分离的双向电泳（2-DE）
蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心。双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E。coli 蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化。双向电泳原理简明，向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离。目前，随着技术的飞速发展，已能分离出10 000个斑点（spot。当双向电泳斑点的全面分析成为现实的时候，蛋白质组的分析变得可行。
样品制备（sample prepareation）和溶解同样事关2-DE的成效，目标是尽可能扩大其溶解度和解聚，以提高分辨率。用化学法和机械裂解法破碎以尽可能溶解和解聚蛋白，两者联合有协同作用。对IEF（isoelectric focusing）样品的预处理涉及溶解、变性和还原来完全破坏蛋白间的相互作用，并除去如核酸等非蛋白物质。理想的状态是人们应一步完成蛋白的完全处理。近来，在“变性剂鸡尾酒”中，含14～16个碳的磺基甘氨酸三甲内盐（ASB14～16 ）的裂解液效果。而离液剂2 mol/L硫脲和表面活性剂4%CHAPS的混合液促使疏水蛋白从IPG（immobilized pH gradients）胶上的转换。三丁基膦（Tributyl phosphine，TBP ）取代β-巯基乙醇或DTT完全溶解链间或链内的二硫键，增强了蛋白的溶解度，并导致转至第二向的增加。两者通过不同的方法来增加蛋白的溶解度，作为互补试剂会更有效。在保持样品的完整性的前提下，可利用超离和核酸内切酶去除核酸（DNA）。除此之外，机械力被用来对蛋白分子解聚，如超声破碎等。另外，添加PMSF等蛋白酶抑制剂，可保持蛋白完整性。由于商品化的IPG胶条是干燥脱水的，可在其水化的过程中加样，覆盖整个IPG胶，避免在样品杯中的沉淀所致的样品丢失。此外，低丰度蛋白（low abundance protein）在细胞内可能具有重要的调节功能，代表蛋白质组研究的“冰山之尖”，故分离低丰度蛋白是一种挑战。亚细胞分级和蛋白质预分级、提高加样量（已达到1～15 mg级的标准、应用敏感性检测，可以提高其敏感性。如一种多肽免疫2-DE印迹（MI-2DE）是利用几种单克隆抗体技术来分析和检测。提高组蛋白和核糖体蛋白等碱性蛋白（basic proteins）的分离是另一难点。由于碱性pH范围内凝胶基质的不稳定及逆向电渗流（EOF）的产生，对PI（等电点）超过10的碱性蛋白，通过产生?0～10%?的山梨醇梯度和16%的异丙醇可减少之。亦可用双甲基丙烯酰胺来增加基质的稳定性。
2-DE面临的挑战是高分辨率和重复性。高分辨率确保蛋白程度的分离，高重复性允许进行凝胶间配比（match）。对2-DE而言，有3种方法分离蛋白：1）ISO-DALT（isoelectric focus）以O’Farrell’s技术为基础。向应用载体两性电解质（carrier ampholyte，CA），在管胶内建立pH梯度。随着聚焦时间的延长，pH梯度不稳，易产生阴极漂移。2）NEPHGE（non-equilibrium pH gradient electrophoresis用于分离碱性蛋白（pH>7.0）。如果聚焦达到平衡状态，碱性蛋白会离开凝胶基质而丢失。因此，在等电区域的迁移须在平衡状态之前完成，但很难控制。3）IPG-DALT发展于80年代早期。由于固相pH梯度（Immobilized pH gradient，IPG的出现解决了pH梯度不稳的问题。IPG通过immobiline共价偶联于丙烯酰胺产生固定的pH梯度，克服了IEF的缺点，从而达到高度的重复性。目前可以精确制作线性、渐进性和S型曲线，范围或宽或窄的pH梯度。新的酸性pH 3～5或碱性pH 6～11的IPG凝胶梯度联合商品化的
原创作者：上海顺元生物科技有限公司
