工具包组件 猫。号 | 样品瓶 | 试剂 | 数量 | 存储 | 8058A | 1 | 染色溶液A | 1毫升 | 4°C | 8058b | 1 | 染色溶液B | 1毫升 | 4°C | 8058c | 1 | 染色溶液C | 0.2毫升 | 4°C | 8058d | 1 | 染色溶液D | 20毫升 | 4°C | 8058e | 1 | X-Gal的解决方案 | 5毫升 | -20°C | 8058f | 1 | 100X修复解决方案 | 1毫升 | 4°C | 质量控制 细胞衰老检测应用于早期通道和衰老ScienCell™人类肾小管上皮细胞(HRPTEpiCs)。数据表明,衰老的细胞显示出积极的SA-β-gal染色,而*早期传代细胞不(图1)。 步骤 A。试剂的制备 1。准备工作定影液,定影液,准备1X PBS稀释100X定影液,股票1:100 。工作染色溶液的制备:准备新鲜的染色样品的数量进行评估的基础上的解决方案。对于每个样本35毫米的钢板,准备以下混合物: X-gal的解决方案 20微升的染色溶液A 20微升染色溶液B 4微升染色液 染色溶液D 1456微升去离子水Ç 400微升100微升 总计2000年微升工作染色液 B.染色协议 1。从细胞中取出培养基,用PBS冲洗两次 。修复细胞培养用2毫升的工作定影溶液在室温下3-5分钟。 吸工作定影液冲洗固定的细胞用PBS 4 三次。染色液工作12-24小时,完全覆盖细胞和培养细胞在37℃,避光,加入2毫升,蓝色应该发展在衰老细胞。检查细胞以规则的时间点以避免过份使劲。 5。孵育后,除去工作染色溶液,用PBS冲洗细胞两次,保持细胞在PBS中,在4℃下 蓝染的细胞,使用光学显微镜检查和计数。 |