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LDH细胞毒性检测试剂盒
点击次数：2402发布时间：2013/4/25 19:53:08
更新日期：2024/8/15 17:15:41
所 在 地：美洲
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优质供应
详细内容
工具包组件
| 猫。没有 | ＃样品瓶 | 试剂 | 数量 | 存储 |
| 8078a | 1 | LDH标准 | 1毫升 | 4 0 C |
| 8078b | 1 | 乳酸钠，10X | 1毫升 | 4 0 C |
| 8078c | 1 | INT，10X | 1毫升 | -20 0 C |
| 8078d | 1 | 底物混合物 | 10毫升 | -20 0 C |
| 8078e | 1 | 钠Oxymate的 | 10毫升 | 4 0 C |
品质管制
从ScienCellT乳酸脱氢酶LDH的解决方案，从500到7.8亩/毫升的浓度毒性检测数据显示OD490nm和LDH浓度（图1）之间的线性关系。ScienCellT LDH细胞毒性检测也被施加到人类的星形胶质细胞（HAS）（阳性对照）和无（阴性对照）的Triton X-100（图2）以不同的密度接种。
程序（96 - 孔板）
- 细胞培养设置
- 在96孔培养板中，在有或没有试验化合物的培养基中加入200μl的种子细胞。在CO2培养箱培养细胞在37℃，需要一段时间。我们建议您至少准备3个重复，每个测试样本。除了测试样品，阳性对照培养液中加入1％的Triton X-100和三负没有任何测试化合物或Triton X-100控制文化中应包括在内。
- 制备的LDH标准（可选）
- 添加2 LDH股票微升498微升PBS 1 U / ml的乳酸脱氢酶，使500微升的解决方案。
- 获得8个试管中，450微升培养基中添加到各管中，并对其进行标记＃1至＃8。
- 加入450微升1 U / ml的乳酸脱氢酶（LDH）解决方案为管＃1拌匀获得500亩/毫升LDH标准。
- 转移450μl的500亩/毫升LDH标准管＃1＃2管拌匀获得250亩/毫升LDH标准。
- 重复步骤4管＃3-7连续稀释LDH标准。不添加任何LDH管＃8，作为空白。
- 得到在96 - 孔试验板，准备3个重复（A，B，C），每个乳酸脱氢酶（LDH）标准，分装到96孔测试板的一式三份的孔中加入150μl/孔的每个乳酸脱氢酶（LDH）的标准，根据下面的盘格式：
＃1 ＃2 ＃3 ＃4 ＃5 ＃6 ＃7 ＃8 一 500亩/毫升 250亩/毫升 125亩/毫升 62.5亩/毫升 31.8亩/毫升 15.6亩/毫升 7.8亩/毫升 空白 乙 500亩/毫升 250亩/毫升 125亩/毫升 62.5亩/毫升 31.8亩/毫升 15.6亩/毫升 7.8亩/毫升 空白 Ç 500亩/毫升 250亩/毫升 125亩/毫升 62.5亩/毫升 31.8亩/毫升 15.6亩/毫升 7.8亩/毫升 空白
- 试验样品的制备和+ /-控制
- 的96孔培养板中，在400g下离心5分钟，并从各孔中（试验，阳性和阴性对照反应孔中加入150μl的上清液转移）到相应的96 - 孔测试板的孔中。
- 测量
- 为了使60微升的工作反应混合物的96 - 孔板的各孔中，添加乳酸钠，2微升2微升的INT基板组合，以36微升PBS和20μl。
- 中加入60μl反应混合物倒入含有LDH标准，测试样品或控制96 - 孔测试板的各孔中工作。在黑暗中于室温下孵育20分钟。
- 用20μl的草氨酸乙酯钠溶液使反应停止，96 - 孔板每孔。
- 用ELISA板读数器在490nm处读取吸光度值。
- 计算
- 平均OD490nm复制井每个LDH标准，测试样本，控制，和空白。获得的所有其他样品的平均OD490nm值减去平均OD490nm值的空白。
- 校准OD490nm的乳酸脱氢酶（LDH）标准的基础上，使作为乳酸脱氢酶（LDH）浓度的函数作图OD490nm的标准曲线。（参见图1为一个典型的标准曲线。）趋势线的确定方程和R2值。
- 假设趋势线的标准曲线方程，计算LDH浓度测试样品和对照如下：[LDH] =（OD 490nm处 - B）/ A
- 计算如下的试验化合物的细胞毒性，细胞毒性（％）=（[LDH] 试样 - [LDH] 阴性对照）* 100 /（[LDH] 阳性对照 - [LDH] 阴性对照）
- 如果是不需要的，确切的乳酸脱氢酶（LDH）浓度的乳酸脱氢酶（LDH）的标准曲线的测量可以被跳过，并且还可以计算出试验化合物的相对细胞毒性基于OD490nm值如下：细胞毒性（％）=（OD 490nm处，测试样品 - OD 490nm处，阴性对照组）* 100 /（OD 490nm处，阳性对照 - OD 490nm处，阴性对照）
