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NO一氧化氮色标法检测试剂盒
点击次数：698发布时间：2013/4/25 19:56:04
更新日期：2024/8/15 17:15:41
所 在 地：美洲
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详细内容
描述
250测试
介绍
一氧化氮（NO），一氧化氮合成酶，由L-精氨酸产生的内源性起着重要的作用，在许多生理过程，包括血管调节，免疫反应，和神经通信。NO是极不稳定的，经历偿还氧化降解亚硝酸根（NO 2 - ）和硝酸盐（NO3-），它可以用分光光度法测定。ScienCell比色法一氧化氮检测试剂盒提供了一个准确的测量NO水平在一个简单的过程分为两个步骤：钒（III）氯化物，硝酸盐还原成亚硝酸盐其次是量化的亚硝酸盐格里斯反应。
工具包组件
| 猫。没有 | ＃样品瓶 | 试剂 | 数量 | 存储 |
| 8098a | 1 | 硝酸盐标准，200μM | 2.5毫升 | 4 0 C，暗 |
| 8098b | 1 | 氯化钒 | 25毫升 | 4 0 C，暗 |
| 8098c | 1 | 格里斯试剂我 | 12.5毫升 | 4 0 C，暗 |
| 8098d | 1 | 格里斯试剂II | 12.5 | 4 0 C，暗 |
| 8098e | 1 | 20×硫酸锌4 | 12.5 | 4 0 C |
品质管制
施加的ScienCellT比色法一氧化氮含量硝酸盐标准系列稀释200 3.13μM。具有不同培养时间/温度得到的标准曲线示于图1。
程序
- 去蛋白样品
- 混合285微升的各试样（例如，细胞培养上清液），将15μl20×硫酸锌在一个1.5毫升的微管，涡为1分钟，离心10分钟，4℃10,000 RCF，和转移100微升/良好的上清液到96 - 孔板的每个孔中。我们建议您准备每个样品重复三次。
- 下游硝酸盐标准
- 获得8个测试管和标记A至H加入到管B的DI H2O 300微升至H
- 插入管A中添加300微升200μM的硝酸盐标准溶液
- 加入300微升的200微米硝酸盐标准溶液放入试管B拌匀得到100微米的硝酸标准。
- 将300微升100微米硝酸盐标准从B管内胎C拌匀得到50微米的硝酸标准。
- 重复3管DG步串行稀硝酸标准。不添加任何硝酸盐溶液到管H，作为空白。
- 取得在96孔测试板，准备3个重复每个硝酸标准分装到96 - 孔板的一式三份的孔中的100μl/孔的每个硝酸标准，根据表1中所示的盘的格式。
- 测量NO 3 - / NO 2 -
- 50微升Griess试剂混合100μl的氯化钒，作出新的反应“鸡尾酒”I和Griess试剂II 96 - 孔板的各孔中加入50μl。准备充分的反应“鸡尾酒”样品/标准品的数量进行评估的基础上。
- 添加200μl的反应“鸡尾酒”到各孔中含100μl的样品或标准硝酸和孵育在30至120分钟，在室温下，从光*保护。解决方案应该把一个淡粉色。
- 在ELISA板读数器与测试在540 nm的波长和参照波长在630 nm处测量吸光度，并减去630 nm的背景从540 nm处测量吸光度。
- 计算
- 平均校准每个样品的吸光度值（OD540nm），硝酸盐标准和空白井。
- 从平均OD540nm每个样品和硝酸标准中减去空白的平均OD540nm。
- 生成标准曲线，通过绘制校准OD540nm对硝酸盐浓度的硝酸标准，如在图1中示出。
- 确定基于标准曲线的各样品的硝酸盐和亚硝酸盐的总浓度。
*孵育时间取决于NO3-/NO2-浓度的样品。稀释样品，如果他们过于集中。如果反应走得太远因孵化时间太长或过于集中的样本，颜色可能迷路。在37℃而不是室温孵育，孵育时间可以缩短。
