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孔雀绿磷酸盐检测试剂盒
点击次数：1783发布时间：2013/4/25 19:59:18
更新日期：2024/8/15 17:15:41
所 在 地：美洲
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详细内容
品质管制
从ScienCellT孔雀绿取值范围为1.5625至37.5μM浓度的磷酸溶液与磷酸盐含量的数据显示OD630nm和磷酸盐浓度（图1）之间的线性关系。
程序
- 制备磷酸盐标准
- 准备50微米磷酸盐标准由995微升离子水加入5微升10 mM磷酸盐标准的。
- 准备使用50μM的磷酸盐标准的系列稀释液，根据表1的磷酸盐标准曲线。160微升磷酸盐溶液中制备的每个点提供三个重复为50μl。
- 检测步骤
- 进入96孔板，每孔加入50微升的磷酸盐标准，样品或空白。
- 加入10微升的孔雀石绿试剂A到每口井，混合，在室温孵育10分钟。
- 孔雀石绿试剂B中加入10μl每孔混合，在室温下孵育20分钟。
- 在酶标仪在630 nm处的吸光度。
- 计算
- 平均OD630nm重复每个磷酸盐标准，样品和空白井。获得的所有其他样品的平均OD630nm值减去平均OD630nm值的空白。
- 校准OD630nm的磷酸盐标准的基础上，作出的标准曲线，通过绘制的OD630nm作为磷酸盐浓度的函数。（参见图1为一个典型的标准曲线。）趋势线的确定方程和R2值。
- 假设的趋势线的方程的标准曲线，计算样品的磷酸盐浓度如下： OD 630nm的 - B
[PO 4 3 - ] = __________
Ä
| 号 | 50μM磷酸盐（μL） | 离子水（μL） | 磷酸盐浓度（μM） |
| 1 | 160 | 0 | 50 |
| 2 | 80 | 80 | 25 |
| 3 | 40 | 120 | 12.5 |
| 4 | 20 | 140 | 6.25 |
| 5 | 10 | 150 | 3.125 |
| 6 | 5 | 155 | 1.5625 |
| 7 | 0 | 160 | 0（空白） |
