如何更行之有效地进行药物溶液稳定性试验。

方法：应分别从主峰和各杂质的峰面积及分别所占总峰面积的百分比（采用归一化法）的经时变化来判断，同时还要观察是否有新的杂质产生，只有这样才能达到全面论证的效果。

结论：应分重视溶液稳定性试验的验证方法和其重要性，以及在实际应用中的注意事项。

药物溶液稳定性试验，是方法学认证过程中极为重要的一个环节。它属于耐受性试验的范畴；在某些书籍中，它有时又被归纳为日问精密度试验的一个内容。但无论怎样，溶液稳定性试验在方法认证的过程中是必不可少的，是方法学各项认证的前提和基础。本文将主要就溶液稳定性试验应如何进行、实施及其重要性和目前存在的问题进行阐述。溶液稳定性试验将决定试验的准确性和*终试验结果判断的科学性，它的实施应该分为以下几个步骤。

1 需要验证药物溶液稳定性试验的项目

一般般在有关物质、含量测定及溶出度等的测定方法立时，需要进行该项认证。但当有关物质与含量测定采用的为同一溶剂时，则只需在有关物质项下验证即可。此时不要在含量测定项下验证，因含量测定时的浓度一般情况下小于有关物质测定时的浓度，主药与杂质峰面积均较有关物质测定时小，存在着一个检出限的问题，故应选用有关物质测定时的溶液来进行。

2 药物溶液稳定性试验在方法学认证中的顺序

方法学认证需要进行若干项试验，而溶液稳定性试验则应该在所有试验之前进行。如稳定性不好，溶液配制后即开始有降解，这就需要试验者在后面的各项认证中均需加以注意，并做适当的调整，总之要做到“心中有数”。

3 采用何种溶液

目前国内普遍采用的只有对照品溶液，而忽略了对供试品溶液的验证。对于原料药，由于不含有辅料，对照品溶液与供试品溶液的状态完全相同，这时是可以的；但在制剂的情况下，由于供试品溶液中含有辅料，与对照品溶液的环境不完全相同，其中的辅料势必存在着某种干扰的可能性，故应对对照品溶液和供试品溶液同时验证。

4 验证方法与评价指标

国内目前在申报新药和发表的学术期刊中，通常选用的方法为：取一相关溶液，在不同时间间隔连续进样若干次，取每时间点的主峰峰面积，计算其相对标准偏差（RSD），如小于2．0％，则认为该溶液稳定性良好；如是含量测定项下，有时也同时将其做为日内（间）精密度试验。主峰峰面积的相对标准偏差用于日内（间）精密度试验这是完全可以的，但溶液稳定性试验仅仅观察主峰峰面积的变化却是远远不够的，还必须采用归一化法观察主峰峰面积占总峰面积百分比的经时变化，以及各单个杂质峰面积和各杂质总峰面积的和分别占总峰面积百分比的经时变化（主成分降解产生的杂质为原固有存在的杂质时），同时还要观察是否有新杂质峰产生。因为当主药有微量降解时，由于其主峰峰面积较大，且HPLC仪器的进样也存在有一定误差（一般认为在2．0％ 以内），所以在峰面积上的表现有时是观测不出来的，做RSD统计时，也依然在2．0％以内，甚至更小；但主药的微量降解，通过主峰峰面积的百分

比、各杂质峰面积分别占总峰面积的百分比以及是否有新的杂质产生，这些相对值就能清楚、客观、充分地体现出来。因为各物质的面积百分比，其本身是一较为固定的相对值，它的变化是*能直观说明问题的。举例如下：在用HPLC法测定青蒿琥酯原料药有关物质时 ，供试品溶液的稳定性试验数据。

5 采用何种检测方法

在有关物质方法建立时，如主药与其杂质有紫外吸收，建议选用HPLC法；即使仅仅为末端吸收时，本人也建议选用HPLC法。因为HPLC法可以非常直观地观察到所能检测到的所有物质峰面积的经时变化，尤其是对含量较少的杂质的微小变化，可以用一个比较准确的量来评价，这一点对于溶液稳定性试验和样品长期试验考核、加速试验考核等显得尤为重要。而TLC法在准确定量上很难做到，虽然可以采用梯度对照点样、半定量的方法进行，但对于杂质的微小变化却显得力不从心了。在上面所列举的青蒿琥酯原料药有关物质测定的例子中，由于考虑到青蒿琥酯与其相关杂质均为末端吸收，笔者也曾在HPLC法测定前，根据文献[2]采用TLC法进行过测定，结果杂质1的测得量为1．0％左右，虽然采用的是相同的供试品溶液，并也是配制好后立即点样，但由于有一个晾干点样点、展开、再晾干、喷显色剂、100℃加热20 min等的时间差，样品在这一段时间内已有部分降解；再加上评判时为肉眼观察、比较，势必存在着一个较为模糊的概念，故*终检测到的结果已经是溶液经3 h后检测到的结果。所以，笔者建议在建立有关物质检测方法时，在条件允许的情况下，应尽量选用HPLC法 。

6 验证的时间和采样间隔

如有关物质与含量测定均为HPLC法时，一般情况下应至少进行12 h的稳定性考察⋯ ，前面采样

间隔应短些，后面可加大间隔；如含量测定与溶出度测定均为UV法时，则至少应持续进行2 h的稳定性考察。

7 讨论

7．1 在需要验证药物溶液稳定性试验的项目中，笔者认为pH值测定时所配制的溶液，也应对其进行稳定性的考察。一般情况下，pH值测定时的溶液配制方法与限度范围均有文献参照；如没有，需自行建立。笔者建议，无论有无文献参照，都应考核主药在所选用的溶剂中，pH值是否能呈一稳定状态，并应至少有10 min以上的连续记录。笔者在新药复核中，就曾数次遇到此类问题的发生，溶液的pH值不稳定，始终处于波动状态，无法准确测定。此时，则

一定要对溶剂做进一步的筛选，直至筛选到一较为稳定的溶剂为止。

7．2 药物溶液稳定性如不好，一方面可采用的方法为，根据主成分的结构，寻找相对稳定的溶剂，如主药本身具有一定的酸性，则应尽量选用酸性溶剂等。另一方法为，如果降解速度还可以承受，还不至于对试验的*终结果有较大的影响，则应在质量标准中明确注明，溶液配制后应立即进样，以免由于时间上的原因而导致不准确的判断，错误法劣化了产品质

量。

7．3 制剂的含量测定和溶出度检查，完全可以由UV法来进行时，则没有必要一定要采用HPLC法。此时，则只要对相关溶液的吸收度在一定时间内是否保持稳定进行判断即可。

7．4 在验证12h内的稳定性试验中，应注意避免因溶剂挥发而给峰面积测定带来的影响。

7．5 积分时应保持积分参数对各图谱的一致性，以消除因积分不同而带来的系统误差。

7．6 药物溶液稳定性的好坏体现在质量标准中时，就是注明溶液配制后是否应立即进样。如果是由于溶液不稳定，而未采取立即进样的措施，导致*终测定结果为有关物质超出规定限度，药品不合格，这样就会直接影响到该产品在生产、流通和检验上的错误判断。笔者在工作中，就曾多次遇到该类问题，故其重要性不言而喻，其验证方法也应引起研发人员和试验人员的充分重视。

原创作者：上海锡为科学仪器有限公司