链霉亲和素琼脂糖凝胶FF的使用方法

链霉亲和素琼脂糖凝胶FF

（Streptavidin Berpharose FF）

1.产品介绍

链霉亲和素琼脂糖凝胶FF（Streptavidin Berpharose FF）是一种将链霉亲和素（Streptavidin）键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和层析分离介质，利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用分离纯化生物素或生物素化的抗原、抗体、核酸等物质。

链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，需要在变性条件下洗脱，这个特性可用于抗原与抗体的分离，如将生物素化的抗体结合在凝胶上，然后利用抗原抗体的亲和特性纯化无生物素化的抗原，抗原洗脱时抗体不会被洗脱。链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5-11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。                   

2.规格

1ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）、20ml、100ml、500ml

3.产品性能

3.纯化流程

①缓冲液:

（1）纯化生物素或生物素化物质

结合缓冲液：20mM NaH2PO4, 150mM NaCl，pH7.4

洗脱缓冲液：8M盐酸胍，pH1.5

（2）纯化2-亚氨基生物素或2-亚氨基生物素标记的物质

结合缓冲液：50mM碳酸铵，500mM NaCl，pH10.0

洗脱缓冲液：50mM乙酸铵，500mM NaCl，pH4.0

（3）纯化抗原或抗体

结合缓冲液：20mM NaH2PO4，150mM NaCl，pH7.4

洗脱缓冲液：100mM甘氨酸-盐酸，pH3.0

注：

用于生物素化的抗体纯化未生物素化的抗原（或生物素化的抗原纯化未生物素化的抗体）有2种方法，①可先在游离状态下抗原与抗体结合，然后当样品纯化即可；②也可以将生物素化的抗体（或抗原）先结合柱上，然后对应的未生物素化的抗原（或抗体）当样品纯化。

②样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。

③样品纯化

（1）取适量的链霉亲和素琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100cm/h。

（2）将准备好的样品缓慢上柱，为保证样品与链霉亲和素充分结合，应控制好上样流速，建议流速为15-50cm/h。

（3）上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100cm/h。

（4）用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积，建议流速为100cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

（5）洗脱目的蛋白后的柱子应立即用中性的结合缓冲液平衡，并用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

6.注意事项：

1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。

2)去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质3-4倍柱体积70%乙醇或2倍柱体积的1% TritonX-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

3)本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。

4) 2-25℃,常压,避光运输。

5)仅供科研实验使用。

链霉亲和素琼脂糖凝胶FF的使用方法

原创作者：上海信帆生物科技有限公司