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技术文章

过碘酸-雪夫(PAS)染色试剂盒实验原理和实验方法

点击次数:17410 发布时间:2015/10/19 16:38:33

 上海信帆生物代理销售过碘酸-雪夫(PAS)染色试剂盒,现货供应,欢迎联系!

实验原理
  胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodicacid)氧 化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。该反应称为过碘酸-雪夫 (PAS)阳性反应,以前也称为糖原染色。
实验方法
  材料:
  1.高碘酸氧化液:
  HIO4·2H2O1g,
  蒸馏水加至100ml。
  此液溶解后保存于冰箱中待用。
  2.Schiff试剂:
  将1g碱性品红溶于200ml煮沸的蒸馏水中。摇荡5分钟,冷却至600C左右,过滤,并向滤液中入1mol/LHCl20ml,混匀。冷至 250C时,加2g偏重亚硫酸钠(或钾)(Na2S2O5)。将此液置带塞的棕色玻璃瓶中,放暗处24小时。加1g活性碳,摇动1分钟,滤纸过滤。保存于 冰箱中。
  3.亚硫酸液
  100g/L偏重亚硫酸钠6ml
  1mol/L盐酸5ml
  蒸馏水100ml
  每次用前新鲜配置。
  4.20g/L甲绿
  甲绿2g
  蒸馏水加至100ml
  5.淀粉酶嚼石蜡刺激分泌唾液离心取上清液,内含淀粉酶,将麦芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.0)100ml中。
  方法:
  1.固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min,蒸馏水冲洗,待干;
  2.如涂片需要消化,可加唾液或麦芽糖淀酶,置室温消化60min,然后用蒸馏水冲洗;
  3.10g/L高碘酸氧化15~20min,蒸馏水冲洗,待干;
  4.置雪夫染液中室温染色30~60min;
  5.用亚硫酸溶液冲洗3次后,再用自来水冲洗2~3min,待干;
  6.20g/L甲绿复染10~20min;
  7.水洗,待干,镜检。
实验结果计算
  (1)中性粒细胞糖原含量参考标准:
  (-)胞质无颗粒
  (+)胞质呈淡红色,无颗粒
  (++)胞质呈红色,有少量颗粒
  (+++)胞质呈暗红色,颗粒较密
  (++++)胞质呈紫红色,颗粒极密
  (2)淋巴细胞系:

过碘酸-雪夫(PAS)染色试剂盒

原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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