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技术文章
上海信帆生物：ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL
点击次数：16933 发布时间：2016/5/13 20:44:26
(一) 原理
小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体，在有IL-1同时存在的条件下，IL-1可协同丝裂原促t细胞的增殖作用。根据加入IL-1后增殖水平(３H-TdR掺入率)的增加可计算出样品中IL-1的活性单位，或计算出刺激指数。
(二) 操作步骤
取6～8周龄C57BL16小鼠，拉颈处死，无菌取胸腺
置不锈钢网筛上，用注射器针蕊研磨成细胞悬液
调整细胞数为1.5×10７／ml
↓
细胞悬液内加入ConA，使终浓度为3μg／ml，在96孔
培养板中加100μl(1.5×10６细胞)
↓
加入不同稀释度待测样品和IL-1标准品
100μl／孔(ConA终浓度为1.5μg／ml)
↓ 37℃ CO２孵箱 66h
每孔加３H-TdR 0.5μci
↓37℃ CO孵箱 6h
多头细胞收集仪收获于9999型玻璃纤维纸上
↓
烤干，移入液闪瓶中，加适量闪烁液，于液闪仪上测β计数
计算:
1. 从IL-1标准曲线上测得IL-1的活性单位
2. 也可用刺激指数(SI)表示
实验组cpm
SI＝────── ×100％
对照组cpm
(三) 试剂和器材
1. 10％ FCS RPMI1640，96孔培养板，CO孵箱
2. 标准IL-1， ConA
3. ３H-TdR，PPO、POPOP，二甲苯
4. 9999型玻璃纤维滤纸，细胞收集仪
5. β液闪计数仪
(四) 注意事项
1. 不同品系小鼠对IL-1的反应性有差异，据国内资料报道以C57BL为好。
2. 不同周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应性不一，一般选用6～8周龄，小于5周或大于10周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应不稳定。
3. ConA促丝裂原作用要进行预试，一般采用亚适剂量。
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原创作者：上海信帆生物科技有限公司
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