明胶酶谱试剂盒（MMP2/MMP9）的正确使用方法


MMP检测样本注意事项：

细胞培养基要用无血清培养基；

样本裂解时不含EDTA；

明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液 配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。




检测出来实例

因为检测蛋白活性,所以应尽量避免蛋白变性,我们一般都要求冰上操作,电泳也放在冰水里进行的。

关于信帆生物的明胶酶谱法试剂盒里面的substrateG是10×的使用方法说明：substrateG是10×使用说明：看老师配多少胶，比如老师用10ml的胶，就往里边加1ml的substrateG就可以了。将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明，但凝胶背景并非真正全黑。解决办法：可用非透射光扫描，或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示，并尽量设置为黑色。MMP条带则为白色 。

使用我司明胶酶谱试剂盒发表的文献：
本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合，导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行25-50次标准小胶检测（如果样本MMP含量高，孵育时间短，不用换液可*多50次），如果小胶加样孔为10~15个，则总计可*多检测500~750个样品。

本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合，导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行25-50次标准小胶检测（如果样本MMP含量高，孵育时间短，不用换液可*多50次），如果小胶加样孔为10~15个，则总计可*多检测500~750个样品。

明胶酶谱试剂盒（MMP2/MMP9）的正确使用方法

原创作者：上海信帆生物科技有限公司