过氧化物酶（POD）检测试剂盒用过的都说好！

微量法（100管96样）

测定意义：
POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚
类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：
POD 催化H2O2 氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰
和蒸馏水
试剂的组成：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存；用时加入3mL 试剂一充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂三：液体3 mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min 以上。
3、 样本测定表
试剂名称（μL） 测定孔
样本 10
蒸馏水 60
试剂一 120
试剂二 30
试剂三 30
在微量石英比色皿或96 孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm 下30s
时的吸光值A1 和1min30s 后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意：
1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺
乳动物）或25℃（其它物种）放置10min 以上，测定时加入10μL 样本和240μL 混合液测
定。
2、如果ΔA 小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA 大于0.5，可将样本用提取液
稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。

过氧化物酶（POD）检测试剂盒用过的都说好！

原创作者：上海信帆生物科技有限公司