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技术文章

蛋白快速银染试剂盒现货供应,银染试剂盒促销

点击次数:17077 发布时间:2018/7/17 10:42:11

 蛋白快速银染试剂盒现货供应,银染试剂盒促销

产品简介:

蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于 SDS-PAGE

非变性 PAGE 等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可明显降低背景。其优点

还在于:
1、操作简单、快速;
2、可用于 2D 凝胶的银染,并可进行后续的质谱检测;
3
目的条带清晰;
4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit Protein Silver Stain Kit

比,前者操作速度更快,但检测灵敏度可能低于后者,尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。


本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

自备材料:

1、水平摇床或侧摆摇床

2、去离子水(超纯)

3、乙醇、冰乙酸

 蛋白快速银染试剂盒现货供应,银染试剂盒促销

操作步骤(仅供参考)

1、准备工作:以下操作以 8.5×5.5cm、厚度为 1.0mm 的凝胶为例,以凝胶全部浸没到溶

液为准,一般用量是 25ml,对于凝胶体积较大的,各溶液的使用量需按凝胶体积比例

放大。整个银染过程应在摇床上进行,摇床转速控制在 6070rpm。提前配制固定液,

即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗涤液,即按无水乙醇:

离子水=1:4 的比例配制。

2、水洗:电泳结束后,取凝胶放入去离子水中清洗 2 次,每次 5min

3、固定:取凝胶放入 50100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 1520min,重复固定步

1

4、洗脱:取凝胶放入洗涤液中清洗 2 次,每次 5min

5、水洗:去离子水清洗凝胶 2 次,每次 5min

6、增敏:配制银染增敏工作液,即取   Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml  加入到 50ml

去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Sensitizer,一般应2h内用完。室温下用1×Silver  Stain

Sensitizer 孵育凝胶 2min,立即用去离子水清洗凝胶 2 次,每次 1min

7、银染:配制银染工作液,即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去离子水中,混匀,

即得 1×Silver Stain,一般应 2h 内用完。取凝胶入 1×Silver Stain,在摇床上室温摇动 10

20min

8、水洗:弃液,在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次,每次 30s,摇动速度在 6070rpm

总的水洗时间应控制在 1.5min 内。

9、显影:配制银染显影工作液,即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去离

子水中,混匀,即 1×Silver Stain Developer,一般应 30min 内用完。清洗凝胶后,立即

置于 1×Silver Stain Developer 中,室温孵育 210min,直至蛋白条带清晰可见。一般

显色 30s 后就会出现棕色沉淀,继续显影 23min,亦可延长至 5min 以上,如果显影效

果不佳,可重新更换 1×Silver Stain Developer 继续显影。

10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度,背景染色。立即加入银染终止液,摇床上

摇动 10min,以终止显色反应。(配制银染终止液,即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml

加入到 90ml 去离子水中,混匀,即 1×Silver Stain Stop Buffer,一般应 24h 内用完。)

11、保存:弃终止液,加入去离子水 50ml,摇床上摇动 25min,弃液。短期保存于新鲜

去离子水,长期保存可以制备干胶。

注意事项:

1、背景过深:显色时间过长;洗涤不充分;凝胶中残留物质未去除干净;去离子

水的纯度过低。

2、蛋白条带较浅:蛋白的半胱氨酸含量过低;银染后水洗时间过长;蛋白量较低;

固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。

3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:凝胶没有被充分浸没,应加入足量溶液;容器没

有清洗干净;凝胶接触金属物质;指纹或其他压迹。

4、本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:  6 个月有效。

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原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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