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技术文章
GUS染色步骤
点击次数:18067 发布时间:2019/5/17 9:23:52
gus(β-glucuronidase,β-D- 葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因,其表达产物β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)是一种水解酶,能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解,它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯(X-gluc.htm' target=_blank>x-gluc)分解为蓝色的物质,其检测方法简单、快速、灵敏、稳定,且背景活性低。因为绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS活性,因此gus基因广泛用作转基因植物的报告基因,尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。
GUS染色步骤:
1.取材:将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片,放于1.5ml离心管中。
注:用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如,拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片(1-3mm)。当操作大的组织和样品时,可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。
2.染色:加入适量配制好的GUS染色工作液至完全覆盖材料;锡箔纸包好后摇床摇动10分钟或更长时间至材料出现蓝色。注意要做阴性和阳性对照实验。
3.洗脱:将材料转入无水乙醇或80%丙酮中脱色2-3次,至阴性对照材料为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点很稳定,在酒精中不褪色。
4.观察:一般染色后,GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼就能看到。但是有些材料可能蓝色斑点很细微,要在显微镜下才能看到。
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信帆生物销售病理沉着物和色素染色:普鲁士蓝染色液、Masson-Fontana黑色素染色液、脂褐素染色液、钙盐染色液、尿酸盐染色液、茜素红S染色液;碳水化合物染色:糖原PAS染色液、AB-PAS染色液、黏液卡红染色液、黏液HID-AB染色液、Alcian阿利新蓝染色液(pH2.5)、黏蛋白染色液、淀粉样物质染色液、纤维素染色液;神经组织染色:Luxol Fast Blue髓鞘染色液、改良Bielschowsky神经染色液、尼氏染色液(焦油紫法)、核仁组成区嗜银蛋白染色液(AgNOR Stain)等
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