明胶酶谱分析试剂盒操作要领大揭秘

上海信帆生物供应明胶酶谱分析试剂盒，操作简单方便，可以同时检测MMP2和MMP9的活性，操作方法和免疫印迹相类似。

操作要领：

1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡。

2.明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。

3.用大梳子。

4.孵育液的PHzui好在7.5-7.6，复性的TRITON时间长了会有絮状物，所以实验时尽量使用新鲜配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培养箱中，因为会改变孵育液的PH值，在普通孵箱即可。

6.明胶要4度保存，配好后1周内使用。

7.样本活性低可以延长孵育时间到48小时

MMP检测注意事项：细胞培养基要用无血清培养基；样本裂解时不含EDTA,明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液 配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。因为检测蛋白活性,所以应尽量避免蛋白变性,一般都要求冰上操作,电泳也放在冰水里进行的。

附上一张明胶酶谱试剂盒的条带图

 明胶酶谱分析试剂盒操作要领大揭秘

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理1和程序是：制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测，如果小胶加样孔为10~15个，则总计可检测500~750个样品。

原创作者：上海信帆生物科技有限公司