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黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒可以检测哪些样本？
点击次数：17054 发布时间：2020/7/21 10:59:18
黄曲霉毒素总量elisa试剂盒可以检测哪些样本？
上海信帆生物供应黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒，可以检测可定性、定量检测米、面、油、坚果、辣椒等样本
黄曲霉毒素总量(Aflatoxin Total)ELISA 试剂盒说明书
【概要】
黄曲霉毒素是一类真菌（主要是黄曲霉和寄生曲霉）代谢 的有毒产物，主要存在于谷物，坚果，棉籽以及一些与人类血 液，动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素以 AFB1、AFB2、 AFG1 和 AFG2这四种毒素为主，黄曲霉毒素总量一般是指这 四种毒素的总量。它们是 I 类致癌物，被证明对人和动物的肝 脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害，是一类毒性很强的致 癌物质。因此，必须对其进行及时检测监控，目前主要的检测 手段是高效液相色谱法（HPLC）。 本产品是基于免疫竞争法检测原理建立的一种快速定量 检测黄曲霉总量(Aflatoxin Total，AFT)的试剂盒。它具有简单、 快速，无需特殊仪器设备等优势，既可以用于实验室检测，也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定。
【适用范围】
本试剂盒可定性、定量检测米、面、油、坚果、辣椒等粮 油及其加工产品和饲料中的黄曲霉毒素总量。
【试验原理】
本测试盒采用固相酶联免疫吸附 ELISA 原理，通过抗 黄曲霉毒素抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以 及酶的催显色反应相结合来检测 AFT，样本吸光值与其 所含 AFT 的含量成负相关，对照标准曲线，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中 AFT 的含量。
【试剂盒组成】
1. 96 孔板（8 孔*12 条）
2. AFT 标准溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶） 0 ng/mL,0.1ng/mL,0.25 ng/mL, 0.75 ng/mL, 2.5 ng/mL
3. AFT 酶标抗原 1 瓶.........................................................6mL
4. 底物液 1 瓶......................................................................6mL
5. 显色液 1 瓶......................................................................6mL
6. 终止液 1 瓶......................................................................6mL
7. 浓缩洗涤液 （20×）1 瓶............................................20mL
8. AFT 浓缩样品稀释液 （10×） 1 瓶...........................20mL
注：48 孔型号试剂盒内容物数量、体积略有差别。
【需要而未提供的设备和试剂】
－－－－酶标仪 450nm
－－－－振荡器
－－－－离心机
－－－－粉碎机
－－－－天平：感量 0.01g
－－－－微量移液器：单道 20L～200L、100L～1000L
－－－－甲醇
－－－－石油醚或正己烷
－－－－去离子水
注：以上仪器均可代购
【试剂配制】
洗涤工作液： 将浓缩洗涤液用去离子水按 1:19 体积比进行 稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水）。
样品稀释液Ⅰ： 将 AFT 浓缩样品稀释液用去离子水按 1:9 体积比进行稀释（1 份浓缩样品稀释液+9 份去离子水）。
样品稀释液Ⅱ：1.5mL 甲醇+8.5mL 样品稀释液Ⅰ。
70%甲醇-水：取无水甲醇，用去离子水按 7:3 体积比例稀释 （7 份无水甲醇＋3 份水）
【样本前处理步骤】
一、玉米、大米、麦类等谷物处理方法（稀释倍数：20 倍）
1. 取 5.0g 粉碎好的样品，加入 25mL 70%甲醇-水，混匀；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅰ以 1:3 稀释（例：0.5mL 滤液+1.5mL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待测样液；
4. 移取该液 50uL 进行检测。
二、花生、食用油、豆类等处理方法（稀释倍数：20 倍）
1. 取 5.0g 粉碎好的样品或称取 5.0g 油样，加入 25mL 70%甲 醇-水和 20mL 石油醚或正己烷，混匀；
2. 充分振荡 15min 后过滤于分液漏斗中，静止分层；
3. 取下层甲醇水提取液，用样品稀释液Ⅰ以 1:3 稀释（例： 0.5mL 滤液+1.5mL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待 测样液；
4. 移取该液 50uL 进行检测。
三、酱油、醋等处理方法（稀释倍数：20 倍）
1. 取 5.0g 样品，加入 25mL 70%甲醇-水，混匀；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅰ以 1:3 稀释（例：0.5mL 滤 液+1.5mL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待测样液；
4. 稀释后的待测样液需 pH 值约 7.0 左右，移取该液 50uL 进 行检测。
四、麸皮等饲料原料处理方法（稀释倍数：40 倍）
1. 取 5.0g 粉碎好的样品，加入 50mL 70%甲醇-水，混匀；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅰ以 1:3 稀释 （例：0.5mL 滤液+1.5mL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待测样液；
4. 移取该液 50uL 进行检测。
五、浓缩或配合饲料等处理方法（稀释倍数：20 倍）
1. 取 5.0g 粉碎好的样品，加入 25mL 70%甲醇-水，混匀；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用样品稀释液Ⅰ以 1:3 稀释 （例：0.5mL 滤液+1.5mL 样品稀释液Ⅰ），充分混匀后即为待测样液；
4. 稀释后的待测样液需 pH 值约 7.0 左右，移取该液 50uL 进 行检测。
注意：若样品中 AFT 偏高，建议将样品提取液先用样品稀释 液Ⅰ以 1：3 稀释，再用样品稀释液Ⅱ进一步稀释后检 测。
【检测步骤】
一、测定前须知：
1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温（20～25℃）。
2. 使用之后立即将所有试剂及剩余板条放置 2～8℃。
3. ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致 性，正确的洗板操作是 ELISA 操作中的要点。
4. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，可用盖板膜盖 住微孔板。
二、操作步骤：
1. 将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20~25℃）30min 以上，液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板放回铝箔袋中， 放置于 2~8℃冷藏。不可冷冻。
3. 配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号，建议每个样本和标准品 做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 每孔加入 250μL 左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置 40s 左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干。
5. 每孔加入 250μL 左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置 40s 左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干。
6. 分别加标准溶液/待测样液 50L 到对应的微孔中，再加 入酶标抗原 50L/孔，轻轻振荡混匀，遮盖后 37℃恒温
培养箱中反应 30min。。
7. 小心揭开盖板，甩掉反应液，加入洗涤液 250μL/孔充分 洗涤 5 次，每次间隔 40s，用吸水纸拍干。
8. 每孔分别加入底物液和显色液各 50μL，轻轻震荡混匀， 遮盖后 37℃恒温培养箱中显色 15min。
9. 加入终止液 50L/孔，轻轻震荡混匀，设酶标仪于 450nm 处读取每孔 OD 值。。 (若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。
【结果判定】
标准曲线的绘制与计算
用酶标仪测得每孔的光密度值(A)，绘制标准曲线。通过 准曲线，可准确定量样品中 AFT 含量。 标准曲线：横坐标为 AFT 标准浓度的对数，纵坐标为百 分比 （即各标准品孔和样品孔光密度值除以 0 ng/mL 标准液 孔光密度值(A0)再乘以 100%所得， 光密度值(标准孔或样品 孔) ／光密度值(A0)×100%=％(纵坐标)）。相应每个样品的 AFT 浓度可从曲线上获得。欢迎来电索取专门的数据处理软 件进行计算。
备注：试剂盒初筛后，若出现阳性结果，建议用仲裁法进一步 确证。
【注意事项】
1. 试剂及样本没有恢复到室温（20~25℃）会导致所有标准 的 OD 值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准 曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应 立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒；也不要掺杂使用过了有 效期的试剂盒；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件：试剂盒保存于 2~8℃，不能冷冻，将不用的 微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏 感，因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象：显色试剂有任何颜色表明显色剂变质， 应当弃之。0 标准的吸光度（450/630nm）值小于 0.5 （A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8. 对玻璃器皿和 AFT 溶液消毒用次氯酸钠（10%，v/v） 溶液浸泡过夜。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：保存试剂盒于 2～8℃。
保存期：该产品有效期为 6 个月。生产日期见包装盒。
黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒可以检测哪些样本？
黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒可以检测哪些样本？
原创作者：上海信帆生物科技有限公司
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