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技术文章
小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒操作流程-上海信帆生物
点击次数：17029 发布时间：2020/7/29 17:02:35
小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒操作流程-上海信帆生物
上海信帆生物科技有限公司代理销售小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒，产品操作简单，质量稳定！
【产品名称】
通用名称：小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒
英文名称：Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
【用途】 用于检测羊血清中的小反刍兽疫抗体。
【规格】 2块96孔ELISA板。
【储藏与有效期】 2～8℃保存，有效期9个月。
【试剂盒组成】
| 名称 | 数量 |
| 抗原包被板（PPRV） | 2块（96孔） |
| 20×洗涤液 | 1瓶（30mL/瓶） |
| PPRV阴性血清 | 1管（200uL/管） |
| PPRV阳性血清 | 1管（200uL/管） |
| 酶标单抗5× | 2管（1mL/管） |
| TMB底物 | 1瓶（10mL/瓶） |
| 终止液 | 1瓶（10mL/瓶） |
| 样品稀释液 | 1瓶（14mL/瓶） |
| 说明书 | 1份 |
将酶标单抗5×用样品稀释液做5倍稀释配制工作浓度的酶标单抗1×。
【实验准备】所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右)，加液前充分摇匀。
【操作步骤】
PPRV抗原包被板上阴性血清N、阳性血清P、样品稀释液Cm和样品S的分布如图所示：
1.加样：每块ELISA反应板均需分别设置2孔阴性对照（A1B1）、2孔阳性血清对照（C1D1），2孔稀释液对照（E1F1），加样如下：在A1和B1孔内分别加入50uL/孔PPRV阴性对照血清，在C1和D1孔内分别加入50uL/孔PPRV阳性对照血清，在E1和F1孔内分别加入50uL/孔的样品稀释液。其他孔为被检样品孔，每孔先加入25uL的样品稀释液，再分别加入25uL的被检血清。轻轻震匀后于37℃温育60分钟。
2.甩掉包被板孔中的液体，每孔加入约300μL洗涤液1×，洗板4遍，拍干后每孔加入50μL酶标单抗1×，震荡混匀， 37℃温育30分钟。
3.甩掉包被板孔中的液体，每孔加入约300μL洗涤液，洗板4遍，拍干，加入TMB底物，50uL/孔。37℃避光温育15分钟。
4.终止读数：在上述每孔加入50uL终止液后在酶标仪450nm波长处，测定光吸收值。
【结果判定】
1. PPRV阴性血清的平均OD值即ODNC；PPRV阳性血清的平均OD值即ODPC；酶标单抗平均OD值即ODCm；样品的OD值即ODS 。按照以下方法计算抑制率PI
阳性血清抑制率即 PIPC= [1-ODPC/ODCm)] ×100%
阴性血清抑制率即 PINC= [1-ODNC/ODCm)] ×100%
样品血清抑制率即 PIS= [1-ODS/ODCm)] ×100%
【判定标准】
1.当PIPC 大于60%，PINC小于40%时试验成立，否则该次检测结果无效，否则重新进行试验。
2.被检样品PIS大于50%时，判为小反刍兽疫抗体阳性；被检样品PIS≤50%时，判为小反刍兽疫抗体阴性。
【注意事项】
1. 所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右)，以免温度过低影响抗原抗体反应。
2. 实验前应用温度计检查温箱温度，温度过高或过低影响OD值高低。
3. 包被板反应时严禁堆叠放置，应该平铺且板间有空隙，不要离温箱壁太近。
4. 实验所用移液器及设备应定期校准。
5. 采集的样品要新鲜，并且不要溶血。血清标本在2～8℃放置不要超过2天，室温不超过8小时，如需长时间放置应储存于-20℃。
6. 底物液和终止液对皮肤有刺激性，请带手套注意个人防护。
小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒操作流程-上海信帆生物
原创作者：上海信帆生物科技有限公司
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