血涂片肺泡灌洗液和骨髓涂片制备的制作方法

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样本准备方法及送样运输要求(为保证染色成功率，血液、肺泡灌洗液、骨髓样本建议客户按以下方法自行涂片固定后送样):

1.涂片的制作方法:

(1)取新鲜血液(若用抗凝管收集的血液，放置一般不要超过24h，否则血液中白细胞的数量以及种类会明显减少),选用干净的粘附玻

1.1 血涂片制备:

片，用移液枪吸取10ul的血液，滴加在玻片的一侧(一般都是磨砂对侧)。

(2)再取一片辅助玻片(也可选用盖玻片，依据个人手的力道习惯选择)，以45°角将其宽边靠近血液，血液沿着接触边缘向两边晕

开，当两边都到达边缘时，轻轻地稳健且匀速地推向磨砂面一侧，进行涂片，然后快速果断地拿走载玻片，可见涂片首尾分明，厚薄均

匀。(一般情况下，涂抹速度力道适中的话，取走玻片时载玻片上的血几乎无残留，且涂抹出的血涂片无明显细胞破碎，变形。在显微

镜下可观察到细胞呈单个紧密排列，整体比较均匀。)

(3)自然晾干后，用甲醇浸泡固定15min，自然晾干后4C保存运输。

1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制备:

(1)取细胞悬液，2800r4℃离心5min去上清。若沉淀红色较多，则需要用红细胞裂解液(G2015)裂解红细胞。细胞沉淀加入红细

胞裂解液200ul，涡旋混匀，放在冰上裂解2min后加入1mlPBS终止裂解。2800r4℃高心5min去上清后加PBS重悬。若沉淀红色不

多，则不需要裂解红细胞，直接弃上清液，加PBS重悬。根据细胞沉淀量对应加入PBS:

①若肉眼观察无明显细胞沉淀，直接加入50ul PBS，用移液枪吹打混匀后，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中(3cmx2

cm的椭圆);

②若细胞沉淀量为绿豆大小，加入200ulPBS，用移液枪吹打混匀后，吸取50ul，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中(3

cmx2cm的椭圆);

③若细胞沉淀量很多，黄豆大小或更大，加入1mlPBS,用移液枪吹打混匀后，吸取150ul，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的大

圆圈中(长边约5cm，短边约2cm的椭圆)。在显微镜下观察细胞量的多少，若还是过厚，再用PBS对倍稀释该细胞悬液，直

至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。

(2)用移液枪将细胞悬液铺满整个圆圈，涂片放置自然晾干(因细胞未经固定，不可通过烘箱加快晾干)。

(3)将晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min，自然风干，4℃保存运输。

血涂片肺泡灌洗液和骨髓涂片制备的制作方法

原创作者：上海信帆生物科技有限公司