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伊文思蓝染色液(0.5%)试剂盒,现货供应
点击次数: 537发布时间:2011/3/7
资料简介:
伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式 C34H24N6Na4O14S4,分子量为 960.80, CAS 号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小不血浆白蛋 白相近,而且在血液中不血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪 观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。伊 文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量,也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白 无法透过血脑屏障,所以染色后如果神经系统血脑屏障完整,不血浆白蛋白结合的依文思蓝 无法使其着色。相反,如果神经系统血脑屏障被破坏,依文思蓝就可以进入神经系统并使其 着色。在荧光波长 470nm、540nm 处有强峰,680 nm 处有弱峰。可以使用化学透析法和 比色法进行检测。伊文思蓝不台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活 细胞丌会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数 或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中 0.5%为*常用的 浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死 细胞不活细胞,但无法区分死亡不坏死。 产品组成:
编号名称 StorageEvans Blue Stain(0.5%)100ml4℃ 避光使用说明书1 份
自备材料:1、 注射器、组织匀浆器2、 PBS3、 三或丙酮
操作步骤(仅供参考):(一)血脑屏障通透性1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)数秒至 1 分钟内, 小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中,加入 1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,
1000g 离心 15min。
3、 取上清,加入等量三,4℃孵育 18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清, 按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。
4、 1000g 离心 20~30 min 或 2000g 离心 15min。
5、 取上述溶液 1~2ml,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知丌同梯 度的标准依文思蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文 思蓝含量。
(二)活细胞染色1、取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内,入 100μl Evans Blue Stain 轻轻 混匀,染色 3min(染色时间可适当延长,但丌宜超过 10min)。2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量, 每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下:细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%
注意事项:1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性,请小心防护。
2、 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。3、 血脑屏障通透性实验中,Evans Blue Stain注射量应根据丌同动物以及动物的重量调整。4、 采用低温冷冻离心机进行离心。5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6 个月
伊文思蓝染色液(0.5%)试剂盒