小鼠肿瘤坏死因子α （TNF-α ）试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

详见说明书

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠细胞培养液样本中肿瘤坏死因子α （TNF-α ）含量。 

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肿瘤坏死因子α （TNF-α ）水平。用纯化 的小鼠肿瘤坏死因子α （TNF-α ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中 依次加入肿瘤坏死因子α （TNF-α ），再与 HRP 标记的肿瘤坏死因子α （TNF-α ）抗体结 合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶 的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死 因子α （TNF-α ）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲 线计算样品中肿瘤坏死因子α （TNF-α ）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品*终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD  值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标