测定意义：

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌 功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：

在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游 离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。

自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

样品中 FFA 提取：

1、 血液：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15min，取上清 0.1mL， 加 1.2mL 试剂一，震荡提取 3h，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液待测。

2、 组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后称取约 0.1g 转移至离 心管，按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：12 的比例加入试剂一，震荡提取 3h， 8000rpm，4℃离心 10min，取上清液待测。

3、 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1.2 的比例（建 议 500 万细胞加入 1.2mL 试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超 声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；震荡提取 3h，然后 8000rpm，4℃，离心 10min，取 上清待测。

测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 715 nm。

2.  对照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL

于 1mL 玻璃比色皿，调零。

3.  测定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL

于 1mL 玻璃比色皿，测定吸光值，记为 A。 记为 A 测定管。

FFA 含量计算：

标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994

1.血液中 FFA 含量计算

FFA（μ mol/L）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷V 样=1333×(A-0.0055)

2.  组织中 FFA 含量计算

（1）按样本蛋白浓度计算

FFA（μ mol/mg prot）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按样本质量计算

FFA（μ mol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W

3.  按细胞数量计算

FFA（μ mol/104 cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)

= 0.16×(A-0.0055)÷细胞数量