资料简介：  谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒说明书

100 管/48 样
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶，催化铵离子和谷氨
酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储
存和运输形式。
测定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─
谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm 处有吸
收峰，可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂仍
-20℃保存。
试剂四：15mL×1 瓶，4℃保存。
样本测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂：
试剂名称（μL） 测定管 对照管
试剂一 160
试剂二 160
试剂三 70 70
样本 70 70
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴30min
试剂四 100 100
混匀，静置10min 后，8000g，25℃离心10min，取200μL 上清液至微量石英比色皿或96
孔板中，测定540nm 处的吸光值A。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
GS 活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）GS 活性
单位定义：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每min 使540 下吸光值变化0.01 定义为
一个酶活力单位。
计算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =19×ΔA
2、组织、细菌或细胞GS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义
为一个酶活力单位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定义为一个
酶活力单位。
GS（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =19×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.01 定
义为一个酶活力单位。
GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T =0.038×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.4mL； V 样：加入样本体积，0.07mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。
b.用96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）GS 活性
单位定义：每mL 血清（浆）在每mL 反应体系中每min 使540 下吸光值变化0.005 定义为
一个酶活力单位。
计算公式：
GS（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.005÷T =38×ΔA
2、组织、细菌或细胞GS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.005 定义
为一个酶活力单位。
GS（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.005÷T =38×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.005 定义为一
个酶活力单位。
GS（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.005÷T =38×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1 万个细菌或细胞在每mL 反应体系中每min 使540nm 下吸光值变化0.005
定义为一个酶活力单位。
GS（U/104 cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.005÷T =0.076×ΔA
V 反总：反应体系总体积，0.4mL； V 样：加入样本体积，0.07mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。

如果你想了解更多关于该试剂盒的详细信息，欢迎来电咨询！