血管紧张素I(A I)检测试剂盒如何操作-上海信帆生物
血管紧张素Ⅰ放射免疫分析试剂盒
125I- Angiotensin Ⅰ Radioimmunoassay Kit AⅠ RIA Kit
原理(Principles)
血浆肾素活性(PRA)的测定是以血管紧张素Ⅰ (AⅠ)产生的速率来表示的。血浆中加入
酶抑制剂来抑制转化酶和血管紧张素酶的活性,AⅠ不再进一步降解,使测定结果准确。PRA
的测定是取双份血浆,一份血浆在37℃温育一小时,使肾素作用于血管紧张素原产生AⅠ作为
测定管,另一份血浆在4℃放置作为对照管。应用放射免疫分析法AⅠ的浓度减去对照管AⅠ
的浓度,被温育时间除之,则为单位时间内AⅠ产生的速率,称为肾素活性。本分析药盒标记
物为125I-AⅠ,采用免疫分离剂分离,快速﹑方便﹑准确。
用途(Intended Use)
肾素是由肾脏近球体细胞产生的分子量为40000 的一种羧基蛋白水解酶。它作用于血管紧
张素原产生血管素Ⅰ(AⅠ10 肽)。AⅠ在转化酶的作用下形成血管紧张素(AⅡ 8 肽)。肾素-血
管紧张素系统有多种生理功能。在调节人体血压、水和电解质平衡代谢过程中起着重要作用。
另外,它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切关系。
血浆肾素活性(PRA)和AⅡ浓度的测定已成为原发性和继发性高血压分型诊断、治疗及
研究的重要指标。对一些有关肾脏疾病的诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要的意义。
药盒组成(Components of Kit)
1) AⅠ标准品:冻干品,一套共7 瓶,用1 mL 温育液溶解
A B C D E F 单位
0 0.2 0.6 1.8 5.4 12 ng/mL
2) 125I-AⅠ: 1 瓶冻干品,100T 用11 mL 温育液溶解,50T 用5.5 mL 温育液溶解。
标准品、标记物溶解后分装–10℃保存可用一个月,避免反复冻融。
3) AⅠ抗体: 1 瓶冻干品,100T 用12 mL 温育液溶解,50T 用6 mL 温育液溶解,
4) 温育液: 1 瓶
5) 分离剂: 1 瓶使用前必须充分摇匀
6) 抗凝剂: 1 瓶若有晶体析出可加热溶解
7) 酶抑制剂: 2 瓶
正常参考值(Normal Serum values)
各实验室应根据本实验室条件及接触人群的不同,建立自己的正常值范围。
下列数据仅供参考:
坐姿: 1.68 ± 1.12 ng/mL
注意事项(Attention):血样的采集和保存
1) 待病人脉搏稳定后,坐姿采集肘静脉血2 mL,迅速注入在冰水浴中冷却的含20 μL EDTA 的
试管中,摇匀,放冰水浴中冷却后,在1000 转/分离心5 分钟(4℃离心),分离血浆,
取血浆1 mL 放入另一支已预冷的含有10 μL 酶抑制剂1 和20 μL 酶抑制剂2 的试管中摇匀,
立即测定或置–20℃冰箱保存,可用两周。
2) 激发试验,病人在基础状态采血后,给肌肉注射速尿(0.7 mg/Kg 体重)。总剂量不超过50
mg,保持立位不饮水,两小时后坐姿采血。
注意:注射速尿后两小时内随尿排出的水电解质较多,如病人血钾过低,试血前应适当给
予补充,试验过程中病人可能出现口渴、无力、出汗等,一般不重,如过重应酌情终止试
验,让病人平卧,并给予糖盐茶水。
3) β-阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平,一般在停药两周
后测PRA,得血平等代谢慢的药物应停药三周后测定,不适停药的病人应改服胍乙啶等影
响PRA 较小的降压药。
4) 钠摄入量影响机体PRA 水平,病人测定PRA 三天前应适当减少钠盐摄入量,病人应测定
取血前24 小时尿钠的含量,以供分析PRA 结果时参考。
操作流程(Assay Procedure)
冰冻的血浆样品在流动的冷水中快速融化,快速取两份样品,一份作对照管的放冰水浴中,一
份做测定管的在37℃水浴中保温1 小时,取出后放入冰水浴中。随后在冰水浴中按下表加样
数据处理(Calculation)
按常规方法计算NSB%、B0%、B/B0%
在半对数坐标纸上,以标准品AⅠ浓度为横坐标,以B/B0%为纵坐标,绘制标准曲线,根
据血浆样品(B/B0%)从标准曲线上查得样品测定管和对照管相应的AⅠ浓度值。
PRA ng/mL/hr = 测定管AⅠ浓度– 对照管AⅠ浓度
(当血浆AⅠ浓度超过标准曲线范围时,应将37℃处理的血浆用温育液适当稀释后复测)
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