Western Blot（WB）实验代测

技术应用
通过抗原抗体反应对目标蛋白的表达进行半定量检测，还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析。WB作为一种方便可靠的研究工具，将与谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。

为什么各个抗体都要进行 WB预实验？
对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，与抗原更加有效的结合，从而获得特异性和非特异性背景之间差异的化。每一个抗体都有其特性，因此我们必须通过WB预实验获得背景小，非特异性条带少的实验结果。

预实验的内容如下：
1）确定一抗的稀释比例和孵育时间；
2）选择合适的封闭液及封闭时间；
3）调节合适的上样量，使内参条带灰度值趋于一致。

抗体使用有哪些注意事项？
使用抗体前需仔细阅读说明书，了解抗体的保存条件以及不同用途下的推荐稀释比例。较高浓度的抗体（>0.5mg/mL）通常性质更稳定，受生产工艺和成本控制等因素影响，不同品牌的抗体的浓度也不相同，所以购买时应注意比较，经验不足的实验者往往被抗体的体积迷惑，要注意相同质量下低浓度的抗体体积反而更大。

实验流程：
蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;
送样运输要求：新鲜组织，100mg以上，干冰运输。细胞量为5*10^6以上，收集细胞沉淀，干冰运输。
Western Blot（WB）实验代测