英文名称：Mouse Interleukin 4 (IL-4) ELISA Kit

规格：48T/96T

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

用途：本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠白细胞介素4（IL-4）的含量。

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠白细胞介素4（IL-4）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白细胞介素4（IL-4）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

4.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成

注：

1.  标准品浓度依次为：160、80、40、20、10、0 pg/mL

2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本-稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

操作注意:

严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温所有液体组分使用前充分摇匀。

洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

消除板底残留的液体和手指印，否则影响底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

在储存和温育时避免强光直接照射。

平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

不能使用过期产品。

如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置 

试剂的准备

洗板方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本50μL，空白孔不加。样本不足的情况下，上样量*少10μL。操作方法：待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本-稀释液40μL。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算:

试剂盒性能

1.  检测范围：5 pg/mL - 160 pg/mL。

2.  灵敏度：*-低检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

其他注意事项:

操作安全须知:

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

小鼠白细胞介素4（IL-4）ELISA检测试剂盒