免疫荧光检测(IFC)服务及相关生物学代测服务

免疫荧光检测（IFC）

分类：免疫荧光检测分直接法、间接法、夹心法和补体法。

一般试验方法：

直接法

将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。

间接法

　　如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为抗体，其它步骤的抗原检查相同。

直接法一般实验步骤：

　　1） 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

　　2） 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

　　3）取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

　　4）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

　　5）立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

　　（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ －－++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

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间接法一般实验步骤：

　  1）滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10min后弃去，使标本片保持一定湿度。

　　2）滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30min。

　　3）取出玻片，置于玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗1-2次，然后按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸5min，不时振荡。

　　4）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。

　　5）将玻片平放在有盖搪瓷盒内，37℃保温30min。

　　6）重复操作3。

　　7）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，滴加一滴缓冲甘油，再覆以盖玻片。

　　8）荧光显微镜高倍视野下观察，结果判定同直接法。

服务内容

提供免疫荧光染色服务，并对染色后结果进行显微照相。

样品要求

石蜡切片/冰冻切片/细胞爬片。
目的蛋白一抗。

终产品

染色后的切片；
每张切片提供一张照片；
实验报告。

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