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人硫酸类肝素(HS)ELISA试剂盒说明书+实验指导
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详细内容
人硫酸类肝素(HS)elisa试剂盒说明书+实验指导
【产品中文名称】 | 人硫酸类肝素(HS)ELISA Kit | ||||||||
【产品英文名称】 | Human heparan sulfate,HS ELISA Kit | ||||||||
【保存温度】 | 2-8℃,避光保存 | ||||||||
【产品规格】 | 96T/48T | ||||||||
【有效期】 | 6个月 | ||||||||
操作流程 | |||||||||
1. 加入10 μL 校准品、质控品、待测样品到反应板孔内; | |||||||||
2. 加入100 μL酶标抗体工作液到反应板孔内; | |||||||||
3. 室温摇床温育120 min; | |||||||||
4. 洗板6次; | |||||||||
5. 加入1X底物工作液100 μL; | |||||||||
6. 室温温育15 min; | |||||||||
7. 加入100 μL终止液,摇匀约5 s; | |||||||||
8. 用波长325 nm/420 nm的激发/发射光检测 | |||||||||
ELISA 试验时,注意事项如下: | |||||||||
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。 | |||||||||
有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 | |||||||||
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括: | |||||||||
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。 | |||||||||
其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选: | |||||||||
用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。 | |||||||||
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。 | |||||||||
吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等) | |||||||||
进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。 | |||||||||
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。 | |||||||||
然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 | |||||||||
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。 | |||||||||
有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。 | |||||||||
通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 具体事项请来电咨询。 | |||||||||
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