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小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒
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详细内容
产品名称: | 小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 | ||||||
产品英文名称: | Mouse Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA kit | ||||||
样品形式: | 血清/血浆/细胞培养上清/其它生物液体/组织等(具体情况请咨询) | ||||||
保存与运输: | 2到8℃ | ||||||
应用范围: | 科研用检测试剂 | ||||||
小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 | |||||||
操作步骤 | |||||||
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 | |||||||
8 nmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 | |||||||
4 nmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 | |||||||
2 nmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 | |||||||
1 nmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 | |||||||
0.5 nmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 | |||||||
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 | |||||||
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl, | |||||||
然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 | |||||||
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 | |||||||
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 | |||||||
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 | |||||||
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。 | |||||||
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 | |||||||
7. 温育:操作同3。 | |||||||
8. 洗涤:操作同5。 | |||||||
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 | |||||||
10 分钟. | |||||||
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 | |||||||
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 | |||||||
小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 | |||||||
操作程序总结: | |||||||
计算 | |||||||
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 | |||||||
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标 | |||||||
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, | |||||||
即为样品的实际浓度。 | |||||||
注意事项 | |||||||
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 | |||||||
用完,板条应装入密封袋中保存。 | |||||||
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 | |||||||
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间好 | |||||||
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 | |||||||
4. 请每次测定的同时做标准曲线,好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值 | |||||||
大于标准品孔孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计 | |||||||
算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。 | |||||||
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 | |||||||
6.底物请避光保存。 | |||||||
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. | |||||||
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 | |||||||
9.本试剂不同批号组分不得混用。 | |||||||
小鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA 试剂盒 | |||||||
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