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人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒
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详细内容
产品名称: | 人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒 | |||||
产品英文名称: | Human Gastric Mucin,GM ELISA kit | |||||
规格: | 48T/96T | |||||
检测方法: | 双抗体夹心酶联免疫法(ELISA) | |||||
标本: | 血清,血浆,细胞上清液,组织等 | |||||
种属: | Human\\人 | |||||
试剂盒说明书: | 请来电或者邮件索取 | |||||
人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒 | ||||||
实验材料与试剂配制: | ||||||
1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟,微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。 | ||||||
2. 洗液的配制:按 1:100的比例配制洗液备用。 样品收集、处理及保存 | ||||||
1. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集上清液,以1000×g离心15 | ||||||
分钟,收集上清。 | ||||||
2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞 3次,调整细胞浓度达到10^4-10^6/ml左右,通过反复冻融, | ||||||
使细胞破坏,并放出细胞内成份。或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。 | ||||||
3. 血清: 在室温 下, 血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。 | ||||||
4. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置 10 -20 分钟后, | ||||||
以1000×g离心15分钟,收集上清。 | ||||||
5. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集 ,以 1000×g | ||||||
离心、15 分钟 ,收集上清。 | ||||||
6. 组织标本:切取 组织标本,称取重量0.5mg加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,超声破碎仪, | ||||||
将标本匀浆,以2000 -300rmp离心 20 分钟 ,收集上清进行检测 。 | ||||||
7. 样品 中不能含有 NaN3,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。 | ||||||
8. 保存 :如果样品不能立即检测,应将其分装,-80 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现 | ||||||
沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心 | ||||||
或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解 或更高的温度加热解 或更高的温度加热解或更高的温度 | ||||||
加热解或更高的温度加热解冻。应在室温下解并确保样品均匀地充分解冻。 | ||||||
人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒 | ||||||
操作步骤 : | ||||||
1. 取出 试剂盒,室温( 20 -25 ℃)放置 30 分钟。 | ||||||
2. 分组: 取出 96 孔板 根据待测样品数 量加上标准品的数量决定所需板条,把剩余的板条继续 | ||||||
冷藏处理,分别设标准品组(6个浓度)、空白 孔、待测样品组。 | ||||||
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。 | ||||||
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入100ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入100ul的 | ||||||
蒸馏水;其余微孔中加入100ul的待测样本。 | ||||||
4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul 的酶标溶液 (空白对照孔除外)。 | ||||||
5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37 ℃恒温孵育恒温孵育 1小时。 | ||||||
6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15 -30s 30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。 | ||||||
7. 显色:各孔加入显色剂A液 50ul 后,再加入显色剂 B液 50ul 。 | ||||||
8. 终止: 25 -37 ℃下避光反应10 -15分钟, 加入 50 ul 终止液。 | ||||||
9. 读板:在 450nm波长读取各孔的O 值。注: 读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹, | ||||||
读板时间控制在终止反应后的30 分钟内,以免影响准确性。 | ||||||
人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒 | ||||||
数据计算 | ||||||
1. 绘制标准曲线:各标准品 OD 值减去底色即坚强空白孔OD 值(数据处理如下),绘制标准曲线图。 | ||||||
1.1软件处理:建议用户使logit-log模式或四参数据处理模式( y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d ) | ||||||
1.2计算器或手工作图处理:Logit-log 计算:以6个标准品OD 值的 Logit为纵坐标 y,以标准品的 | ||||||
浓度的 log值为横坐标X,绘制曲线图。logit值计算公式如下:logit=ln(B/ B0)(1-B/ B0)手工 | ||||||
作图:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标,在普通坐标纸上或以标准浓度为 | ||||||
横坐标,对应的 B/B0B为纵坐标在 logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直)。 | ||||||
2. 根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意:如果使用普通坐标纸,查出的 | ||||||
数值应取反对数才是*后浓度值。 | ||||||
3.敏感度:1.0µmol/L | ||||||
人胃粘液素(GM)ELISA 试剂盒 | ||||||
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