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古朵详述细胞培养中的无菌技术
点击次数：949 发布时间：2016/10/28 9:57:34
详述细胞培养中的无菌技术 上海古朵生物简述：
1.实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。
2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌区域，勿在边缘的非无菌区域操作。
3.小心取用无菌的实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口，亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4.工作人员应注意自身的安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染的细胞株应特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台(至少ClassII)。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心毒性，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头的伤害等。
5.定期检测下列项目：
5.1.CO2钢瓶的CO2压力
5.2.CO2培养箱的CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3.无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000小时/HEPA)。
6.水槽可添加消毒剂(Zephrin1:750)，定期更换水槽的水。
原创作者：上海古朵生物科技有限公司
