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小鼠白介素-1β（IL-1β）ELISA试剂盒性能参数
点击次数：266 发布时间：2015/7/20 10:47:37
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠IL-1β 单抗包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的IL-1β 会与单抗结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠IL-1β 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠IL-1β 抗体与结合在单抗上的小鼠IL-1β 结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-1β 浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中IL-1β 的浓度。
标本收集:
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于 1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
5. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。
试验所需自备物品:
1. 酶标仪（450nm波长滤光片）
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1:25）℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。（加热温度不要超过50℃）使用时洗涤液应为室温。。未用完的放回4
3. 标准品: 加入标准品&标本稀释液1.0ml至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀（浓度为500 pg/ml）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度： 500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0 pg/ml样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制250pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）500pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度以此类推。。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μl/孔计），实际配制时应多配制100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体（1:100）成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μl/孔计），实际配制时应多配制 100-200μl。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物（1:100）成工作浓度。当日使用。
原创作者：北京雅安达生物技术有限公司
