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代做ELISA实验,ELISA技术服务,ELISA免费检测
点击次数：211 发布时间：2016/3/10 9:47:15
代做ELISA实验,ELISA技术服务,ELISA免费检测
ELISA可检测标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸腹水、组织等。样本体积：50ul/指标
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、 第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取 50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再 在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混 匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60μmol/L，40μmol/L ，20μmol/L，10μmol/L， 5μmol/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
。近期检测的指标有：
人白细胞介素-10（IL-10）
人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子（TSGF）
小鼠抑制素A（INH-A）
人白介素10（IL-10）
人肿瘤特异性移植抗原（TSTA）
小鼠胰岛素自身抗体（IAA）
人白介素11（IL-11）
人肿瘤相关抗原（TAA）
小鼠胰岛素受体β（ISR-β）
小鼠细胞间粘附分子1（ICAM-1/CD54）
小鼠免疫球蛋白A（IgA）
小鼠胰岛素（INS）
小鼠α干扰素（IFN-α）
小鼠免疫球蛋白G（IgG）
小鼠胰岛素样生长因子1（IGF-1）
小鼠β干扰素（IFN-β/IFNB）
小鼠免疫球蛋白G1（IgG1）
小鼠胰岛素样生长因子2（IGF-2）
小鼠γ干扰素（IFN-γ）
小鼠免疫球蛋白G2a（IgG2a）
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP-1）
猪C反应蛋白（CRP）
小鼠免疫球蛋白M（IgM）
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）
猪D二聚体（D2D）
小鼠诱导型NO合酶（iNOS）
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）
猪E选择素（E-Selectin/CD62E）
小鼠诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）
原创作者：北京雅安达生物技术有限公司
