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Western Blot内参抗体选择原则
点击次数：463 发布时间：2017/6/2 15:01:11
内参抗体种类很多，比如 beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin 等，那么针对
自己的实验，我们该如何选择呢?
下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则：
一、样本种属来源：
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、
Histone H3、 Na/K ATP-ase 等。
2、植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco 等。
3、其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。
二、目的蛋白分子量：
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子 量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋
白分子量相差5KD 以上。比如目的蛋白分子量为45KD，此时不适宜选择β-actin 作为内参，
可以考虑选择GAPDH 或者β-tubulin 作为内参。
三、目的蛋白表达部位：
就一般的蛋白检测来说，β-actin、β-Tubulin 抗体等就可以了，而针对于核蛋白的定量，
特别是样本蛋白就是核蛋白时，选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。常用的
核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3，除此之外，其它常见的核蛋白内参还有PCNA、
K70、K80 等，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos 等
都有使用。而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为Na/K ATP-ase。对于线粒体蛋白的检测，
常用VDAC1 和COX IV 作为内参抗体。
以上几条原则只是针对通常情况，但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际
的试验环境，比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH 的表达增高，
不适合做内参。比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun 由于自身表达变化就不适合做内参;
而在凋亡实验时，TBP、Lamin 等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这
些因素并查询相应文献，在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常，应考虑这方面因
素。
原创作者：北京雅安达生物技术有限公司
