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如何选择ELISA试剂盒?北京ELISA试剂盒说明书

点击次数:229 发布时间:2015/3/3

步、明确检测何种蛋白

第二步、明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性
第三步、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒
第四步、咨询商家ELISA是试剂盒使用的抗体类型:多抗还是单抗? 单抗是针对什么抗原决定簇的?
第五步、 做出自己的判断该买哪个试剂盒
处理方法:
1.加样:分别设空白孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔加待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见孔内有明显蓝色,即可终止)。
5.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测
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