企业档案
- 会员类型：免费会员
- 工商认证： 【已认证】
- 最后认证时间：
- 法人：
- 注册号：****
- 企业类型：生产商
- 注册资金：人民币万
联系我们
联系人：刘经理
热门标签
公司动态
ELISA直接法测长叶车前花叶病毒
点击次数：522 发布时间：2016/8/22
-
ELISA直接法测长叶车前花叶病毒
将不同浓度的待检测RMV溶液作为样品液，在测定板每孔各加250ul,至冰箱（4℃）中孵育过一夜。
- 孵育后，去除孔穴内抗原溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗孔穴3次，每次3min，然后去净洗涤液。
- 每孔穴加250ulRMV的酶标记抗体溶液（用1%牛血清白蛋白的PBS- ween20稀释）在恒温箱（37℃）里孵育3-6h,或6℃下过一夜。
- 去除孔穴酶标记抗体溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗3次每次3min，然后去净洗涤液。
- 每孔穴加入新鲜配备的底物溶液250ul,室温放置0.5h，或者放置出现黄色。
- 加入50ul3N NaOH，终止反应。
- 对每孔穴的黄色溶液，测定449nm波长处的吸光值。
讨论
- 如该聚苯乙烯塑料微量反应板次使用，应分别用标准浓度的RMV溶液、RMV的抗血清及RMV与它的IgG形成的免疫结合物，进行期盼滴定法来测该聚苯乙烯塑料微量反应板对RMV抗原和它的抗体的吸附能力。
- 在正式测样品前，用0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液配置各种标准浓度的RMV溶液，依照实验步骤测定RMV各种标准浓度的A449nm值，以病毒标准浓度为横坐标，A449nm值为纵坐标绘制标准曲线，由此可以测出RMV包被的*适合浓度。
- 测出原始底物的吸光值，以便核准数据。
- 对照标准曲线，就可算出样品液中RMV的含量。
- 如无牛血清白蛋白，可用0.1%白明胶代替。
- 对于不稳定的病毒，用中性缓冲液稀释。
- 如有ELISA测定仪，可快速测定。
