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兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒使用方法,北京组织因子elisa试剂盒价格

点击次数:241发布时间:2014/11/18 9:38:33

兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒使用方法,北京组织因子elisa试剂盒价格

更新日期:2022/12/30 11:23:07

所 在 地:中国大陆

产品型号:48T/96T

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详细内容

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使用目的:
本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。
工作原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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操作流程
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结:

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计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
1. 试剂盒保存在2-8,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
标准品(300 ng/ml)
0.5mL
0.5mL
按说明书进行稀释
标准品稀释液
6mL
3mL
按说明书进行稀释
样本稀释液
6mL
3mL
按说明书进行稀释
检测抗体-HRP
6mL
3mL
20×洗涤缓冲液
20mL
20mL
按说明书进行稀释
底物A
6mL
3mL
底物B
6mL
3mL
终止液
6mL
3mL
封板膜
2张
2张
说明书
1份
1份
自封袋
1个
1个
注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:300、150、75、37.5、18.7、0ng/ml.
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储存方式
1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900
2.  灵敏度:检测浓度小于1.0 ng/ml
3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%
5.  贮藏:2-8,避光防潮保存。
6.  有效期:6个月
7.  检测范围:9.3ng/ml-300ng/ml
免责声明
1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或牛体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2.   严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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