产品展示
人胶质细胞系来源的神经营养因子（GDNF）ELISA试剂盒
点击次数：384发布时间：2018/5/24 11:49:48
更新日期：2022/12/30 11:23:45
所 在 地：中国大陆
产品型号：96T
优质供应
详细内容
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。
2. 洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
3. 超净工作台，生物安全柜，通风柜。
4. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).
6. 37℃恒温箱。
8. 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.
9.漩涡混合仪，低频振荡器等
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
3． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
6. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。
7. 各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
8. 每次试验测定的同时做标准曲线，。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n）。
9. 配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，使用微量振荡器(使用频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。
10. 实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。
11. 手工洗板应注意：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。
操作程序
1． 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：
| 250ng/ml | （5号标准品） | 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 125ng/ml | （4号标准品） | 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 62.5ng/ml | （3号标准品） | 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 31.2ng/ml | （2号标准品） | 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
| 15.6ng/ml | （1号标准品） | 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加样:(详细操作流程请联系客服索要说明书）
4． 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。
5． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6． 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7． 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8． 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
结果判断
1.每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）
2.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。
3．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。
4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
