菜豆凝集素（PHA）elisa试剂盒详细资料

菜豆凝集素（PHA）ELISA试剂盒实验目的：用于测量植物中菜豆凝集素的含量，用于观测植物的生长发育

实验原理：二） 用于标记的酶 用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用*广。 　　1.辣根过氧化物酶（HRP） 过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18％），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的*适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50％饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的吸收光谱分别为275nm和403nm。 　　酶的纯度以RZ表示：RZ＝OD403/OD275 　　纯酶的RZ多在3.0以上，为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，非酶蛋白约占 75％，不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢，催化反应时的供氢体有几种：（1）邻苯二胺（OPD），产物为橙色，可溶性，敏感性高，吸收值在490nm，可用肉眼观察判别，容易被浓硫酸终止反应，颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA（酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒）中*常用的一种；（2）联大茴香胺（OD）,产物为橘黄色，吸收值在400nm，颜色较稳定；（3）5－氨基水杨酸（5－AS）：产物为深棕色，吸收值在449nm，部分溶解，敏感性较差；（4）邻联甲苯胺（OT）产物为蓝色，吸收值在630nm，部分溶解，不稳定，不耐酸，但反应快，颜色明显。 　　2.碱性磷酸酶 系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，由多个同功酶组成。它们的底物种类很多，常用者为硝基苯磷酸盐，廉价无毒性。酶解产物呈黄色，可溶，吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中，37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。

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