ELISA酶联法试剂盒操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490

首先齐一生物优质的试剂盒，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠必要条件。所以ELISA试剂盒的购买，试剂质量的保证以及实验前实验仪器的检察都是很有重要性的。保证实验材料的质量之后要严格按照实验步骤进行。齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490

【人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）ELISA试剂盒】齐一生物ELISA试剂盒

1.精心挑选的进口抗体、标准品、显色剂和酶标板全部为进口产品实现*佳性能；

2.原材料批量进口加上自配的特殊配方稀释剂保证高品质产品性能的同时兼顾成本；

3.采用技术，严格按照标准生产方案组装生产；

4.预包被微孔板的批内和批间变异系数均小于10 ％；

5.经过严格交叉反应和干扰测试及稳定性试验；

6.明确的敏感度；

7.针对所有样品类型达到*佳的性能；

8.广泛的检测范围可以满足大多数检测要求；

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【人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）ELISA试剂盒】齐一生物仅供实验人、大鼠、小鼠、兔等动物实验标本检测使用！得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490

ELISA试剂盒问题描述

标准曲线梯度差：

吸液或加液不准请检查移液器及吸头

标准品稀释不正确溶解标准品稍微旋转瓶身，轻轻混匀使粉末完全溶解

洗涤不完全保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量

显色很弱或无色：

孵育时间太短保证充足的孵育时间

实验温度不正确使用推荐的实验温度

试剂体积不够或漏加、稀释不正确检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加

读数数值低：

酶标仪设置不正确 在酶标仪上检查波长及滤光片设置

提前打开酶标仪预热：变异系数大加液不正确检查加液情况

【人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）ELISA试剂盒】背景值高：

检测抗体的工作浓度使用推荐的稀释倍数

酶标板洗涤不完全重新阅读操作手册，保证清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞

洗液有污染配制新鲜的洗液

灵敏度低：

ELISA试剂盒保存按说明书要求保存相关试剂

读数前未终止OD读数前应在每孔中加入终止液

齐一生物客户寄标本时需注明以下情况：

1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。

客户必知：

客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

试剂盒样本要求

在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490

【人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）ELISA试剂盒】液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。

3. 尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

9.如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解

冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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