鸡新城疫抗体检测试剂盒使用说明书

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【原理】

        鸡新城疫是由新城疫病毒（Newcastle disease virus ,NDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病主要特征是呼吸困难、严重下痢、粘膜和浆膜出血，病程稍长的伴有神经症状。鸡感染后，体内会产生特异性抗体。检测抗新城疫病毒抗体可作为该病疫苗免疫状况及该病辅助检测指标。

        本试剂盒采用ELISA方法检测鸡血清中的特异性抗新城疫病毒抗体。本试剂灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

【试剂组成】

【操作程序】

1．洗涤液配制 用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。

2．样本稀释   用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1：100稀释，如取5ul样本与495ul样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3．加样反应   每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟后再甩净，拍干。

4．加酶反应   除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液） 1滴。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5．显色反应   加底物液（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃避光显色10分钟。加终止液（6号液）1滴，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色）并判读结果。

【结果判断】

       阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。

       以空白对照调零，用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度（A值）。待检孔A值大于阴性对照A值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.08时按0.08计算。

【注意事项】

1.试剂盒于2-8℃保存，有效期6个月。每次使用前应先平衡至室温。

2.未使用完的板条应密封保存。

3.试剂盒中终止液具有腐蚀性，要小心使用。

4.瓶盖每次使用后要拧紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

5.试验样本应为无染菌、无血脂、无溶血的血清。任何样本都应视为传染源妥善处理。

6. 37℃孵育时，建议使用水浴箱。如无条件，可在温箱中放置湿盒进行反应并同时用不干胶膜封盖板孔。

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什么是新城疫？

新城疫（newcastle disease,ND）是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。OIE将其列为A类疫病。