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ELISA试剂盒固相载体详解-齐一生物
点击次数：184 发布时间：2016/8/11 10:47:28
ELISA试剂盒固相载体
固相载体在 ELISA 测定过程中作为吸附剂和容器，
不参与化学反应。可作 ELISA 中载体的材 料很多，*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原 吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑 料，可制成各种形式。 ELISA 载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板*为常用，专用 于 EILSA 的产品称为 ELISA 板，上标准的微量滴定板为 8×12 的 96 孔式。为便于作少 量标本的检测，有制成 8 联孔条或 12 联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA 板相同。
ELISA 板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现 在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的 ELISA 检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步 骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的 吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值 较大。 良好的 ELISA 板应该是吸附性能好， 空白值低，孔底透明度高，各板之间、 同一板各孔之间、 同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯 ELISA 板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品 的质量差异很大，因此，每一批号的 ELISA 板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法 为：以一定浓度的人 IgG（一般为 10ng/ml）包被 ELISA 板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀 释度的酶标抗人 IgG 抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸 光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度 0.8 左右。计算全部读数的平均值。所有单个读 数与全部读数的均数之差，应小于 10%。 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为 ELISA 固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可 剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸 附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 为比较不同固相在某一 ELISA 测定中的优劣，
ELISA试剂盒可应用如下的试验：
用其他免疫学测定方法选 出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定 的 ELISA 操作步骤进行测定， 然后比较结果。 在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别， 这种载体就是这一 ELISA 测定项目的*合适的固相载体。 在 ELISA 中， 用作固相载体的小珠一般为直径 0.6cm 的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大 大增加。ELISA 板孔的吸附面积约为 200mm2，小珠均为 1000mm2，将近 ELISA 板孔的 5 倍。 吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。 再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸 附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于*佳反应状态， 因此珠式 ELISA 的反应往往更 为灵敏。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚 动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较 差。 小试管作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式 ELISA 的标本量一般为 100-200ul，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加 有助于试验敏感性的提高。小试管还可以当作比色杯，*后直接放入分光光度计中比色。 也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为 ELISA 固相载体的。其优点是表面积极 大，反应在悬液中进行，其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为 ELISA 固相载体， 反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。
固相载体在 ELISA 测定过程中作为吸附剂和容器，
不参与化学反应。可作 ELISA 中载体的材 料很多，*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原 吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑 料，可制成各种形式。 ELISA 载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板*为常用，专用 于 EILSA 的产品称为 ELISA 板，上标准的微量滴定板为 8×12 的 96 孔式。为便于作少 量标本的检测，有制成 8 联孔条或 12 联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA 板相同。
ELISA 板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现 在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的 ELISA 检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步 骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的 吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值 较大。 良好的 ELISA 板应该是吸附性能好， 空白值低，孔底透明度高，各板之间、 同一板各孔之间、 同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯 ELISA 板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品 的质量差异很大，因此，每一批号的 ELISA 板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法 为：以一定浓度的人 IgG（一般为 10ng/ml）包被 ELISA 板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀 释度的酶标抗人 IgG 抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸 光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度 0.8 左右。计算全部读数的平均值。所有单个读 数与全部读数的均数之差，应小于 10%。 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为 ELISA 固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可 剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸 附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 为比较不同固相在某一 ELISA 测定中的优劣，
ELISA试剂盒可应用如下的试验：
用其他免疫学测定方法选 出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定 的 ELISA 操作步骤进行测定， 然后比较结果。 在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别， 这种载体就是这一 ELISA 测定项目的*合适的固相载体。 在 ELISA 中， 用作固相载体的小珠一般为直径 0.6cm 的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大 大增加。ELISA 板孔的吸附面积约为 200mm2，小珠均为 1000mm2，将近 ELISA 板孔的 5 倍。 吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。 再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸 附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于*佳反应状态， 因此珠式 ELISA 的反应往往更 为灵敏。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚 动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较 差。 小试管作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式 ELISA 的标本量一般为 100-200ul，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加 有助于试验敏感性的提高。小试管还可以当作比色杯，*后直接放入分光光度计中比色。 也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为 ELISA 固相载体的。其优点是表面积极 大，反应在悬液中进行，其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为 ELISA 固相载体， 反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。
齐一生物科技（上海）有限公司，专业从事生物产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程技术公司！为广大科研工作者、企业和学校提供质优价廉的实验室用品，本公司主要经营ELISA酶联免疫检测试剂盒、进口原装ELISA试剂盒、分子生物学检测试剂盒、免疫学检测试剂盒、各品牌原装进口抗体抗原、细胞菌株、生物培养基、生化试剂、实验耗材等多门类上万余种科研试剂产品！产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域！已迅速发展成为国内科学试剂的运营商，是国家重点实验室指定供应商，并与国内多家科研单位紧密合作。产品已被中国科学家使用后在期刊<Cell>、<Nature>、<PNAS>、<Immunity>等上发表文章数超1000篇。
原创作者：齐一生物科技（上海）有限公司
