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【软骨细胞总DNA】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：
1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。
2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。
3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。
4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。
5. 定期检测下列项目：
5.1. CO2钢瓶的CO2压力
5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。
5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。
【软骨细胞总DNA】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！
一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书
二、客户自备试剂
1、PBS
2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
3、0.25% （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）
三、细胞背景
1、生长方式：贴壁
2、种属：Homo sapiens 人
四、培养条件
1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
2、温度：37.0°C
3、气体:空气 95%，CO2 5%
【软骨细胞总DNA】五、培养方法
收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：
1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。
2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml 含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。
3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养
4，传代比例：1:2-1:3
七、常见问题及解决方案
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
细胞培养代理品牌
| | BD 产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学和蛋白质组学等诸多领域，旗下拥有Clontech 、Discovery labware 、Pharmingen 、Falcon 等质品牌，值得称赞的是每一个品牌在其所在的领域都是其中的佼佼者。 |
细胞培养代理品牌
| | GIBCO 作为细胞培养的金字招牌，是在此领域的领导者，现在是Invitrogen的一部分。Gibco可以提供*为广泛的品种以满足用户不同的需求，每一种产品都通过*为严格的品质管理。同时，Gibco也可按客户的要求对培养基的配方进行改动，或完全按客户的配方进行生产。 |
【软骨细胞总DNA】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com
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